[發(fā)明專利]一種利用SSR分子標記法鑒定青稞品種的方法及其用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110685583.6
• 申請日: 2021-06-21
• 公開（公告）號: CN113355444B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姚曉華;吳昆侖;姚有華;安立昆;白羿雄
• 申請（專利權(quán)）人: 青海大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 成都華風專利事務(wù)所(普通合伙) 51223
• 代理人: 杜朗宇

本發(fā)明公開了一種利用SSR分子標記法鑒定青稞品種的方法及其用途，所述SSR分子標記法中的引物序列為Bmag0745、Bmag0496、Bmag0353、Scssr03381、AWBMS0080、GBM1215、Bmag0919、GBM1008、Scssr03907、HVPLASCIB、HVCH126A、GBM1516、Scssr03906、GBM1440、Scssr04163、GBM1413、HVM33、EBmac0415對應(yīng)的引物中的一個或幾個，本申請通過篩選的18對SSR引物進行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和毛細管電泳2種檢測方法，可以更好的區(qū)分青稞品種；其中引物Bmag0496、Scssr03381、GBM1215、Scssr03906、Scssr04163、HVM33可用于24份青稞主栽品種擴增SSR分析的品種聚類圖。本發(fā)明提供的SSR引物具有特異性強、擴增結(jié)果穩(wěn)定、多態(tài)性高等特征，這些分子標記可應(yīng)用于品種鑒定、基因定位、分子鑒定等相關(guān)領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學領(lǐng)域，具體涉及一種利用SSR分子標記法鑒定青稞品種的方法及其用途。

背景技術(shù)

青稞(Hordeum vulgare L.var.nudum Hook.f.)屬禾本科小麥族大麥亞族大麥屬，在植物學上屬于栽培大麥的變種，是我國的原產(chǎn)農(nóng)作物之一，是青藏高原最具特色的農(nóng)作物，是青藏高原極端環(huán)境條件下植物適應(yīng)性進化的典型代表，具有耐旱、耐瘠薄、生育期短、適應(yīng)性強、產(chǎn)量穩(wěn)定、易栽培等優(yōu)異種性，種質(zhì)資源十分豐富。

青稞具有高蛋白、高可溶性纖維、高維生素和低糖低脂的特點，同時含有人體必需的鋅、鈣、鐵、硒等微量元素，營養(yǎng)成分全面，結(jié)構(gòu)合理，所含的大量膳食纖維具有清腸通便，清除體內(nèi)毒素的良好功效，是谷類作物中的佳品。青藏高原的藏民同胞所吃的糌粑和酥油炒面都以青稞為主要原料。青稞籽粒中所含的β-葡聚糖(平均含量為6.57％～8.6％)是青稞特有生理功能元素，對治療人類多種疾病具有特殊療效。由于青稞在食品、保健、飼用和釀造業(yè)中的重要性，且種質(zhì)資源豐富，品種多樣，因此，如何全面細致地了解青稞種質(zhì)資源的遺傳多樣性，較高效率地利用青稞種質(zhì)資源，對育成優(yōu)良專用型青稞新品種十分關(guān)鍵。

分子標記能在DNA水平上反映植物遺傳基礎(chǔ)的差異，是植物遺傳育種領(lǐng)域內(nèi)的一項新興技術(shù)。簡單重復序列(SSR)在整個基因組中分布廣泛，同一類型的微衛(wèi)星序列由于重復次數(shù)或重復程度的差異，從而在每個座位上產(chǎn)生多態(tài)性。SSR分子標記由于具有高的多態(tài)信息含量，呈共顯性遺傳，近年來被廣泛應(yīng)用于各種大麥(青稞)的品種鑒定的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是提供一種利用SSR分子標記法鑒定青稞品種的方法及其用途，所述分子標記中提供的SSR引物具有特異性強、擴增結(jié)果穩(wěn)定、多態(tài)性高等特征，這些分子標記可應(yīng)用于品種鑒定、基因定位、分子鑒定等相關(guān)領(lǐng)域。

SSR分布于青稞基因組的不同位置上，不同品種每個位點上重復單位的數(shù)目及序列可能不同。由于每個簡單重復序列兩側(cè)的序列是高度保守和單拷貝的，因而可以根據(jù)其兩側(cè)的序列設(shè)計一對特異引物，利用PCR技術(shù)對兩條引物間的DNA序列進行擴增。在電泳過程中，得到的PCR產(chǎn)物在電場作用下，由于分子量大小不同得到分離，經(jīng)硝酸銀染色或者熒光染料標記加以區(qū)分。因此，根據(jù)SSR位點的多態(tài)性，利用PCR擴增和電泳技術(shù)可以鑒定青稞品種。

青稞因其籽粒內(nèi)外稃與穎果分離，籽粒裸露，故稱裸大麥，與大麥的基因組相似，但兩者也存在眾多序列差異，發(fā)明人經(jīng)過試驗研究發(fā)現(xiàn)，大麥標準中大多數(shù)引物，如引物Bmac0064、Bmag0603、Bmac0181，利用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢(PAGE)測青稞，引物多態(tài)性較差，大麥引物Scssr15846、Bmag0877在青稞中發(fā)現(xiàn)多態(tài)性較好但是利用毛細管電泳熒光檢測出現(xiàn)特異性不好或者峰值較低的問題。因此，開發(fā)一種多態(tài)性高、特異性強的SSR引物對鑒定青稞品種具有重大意義。

為了解決上述問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：