[發明專利]深綠木霉菌及其在降解毒死蜱中的應用

有效

• 申請號: 202110684510.5
• 申請日: 2021-06-21
• 公開（公告）號: CN113528352B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發明（設計）人: 唐衛東;郎博;孫佳楠;陳捷
• 申請（專利權）人: 上海大井生物工程有限公司;上海交通大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C02F3/34;B09C1/10;C12R1/885;C02F101/38;C02F103/20
• 代理公司: 上海恒慧知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 31317
• 代理人: 張寧展

本發明技術方案公開了一種深綠木霉菌及其在降解毒死蜱中的應用，所述深綠木霉菌為深綠木霉(Trichoderma atroviride)SG3403，已于2012年8月28日保藏于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.6479。本發明技術方案的深綠木霉菌能夠降解水體中的毒死蜱，為農田周邊水域或養魚池水體中的毒死蜱的生物降解或生物修復提供了重要的木霉資源和應用方法，對發展綠色水產養殖技術、保護農田水域環境具有重要意義。

技術領域

本發明屬于微生物發酵技術領域，具體涉及深綠木霉菌及其在降解毒死蜱中的應用。

背景技術

農藥現在被廣泛應用于現代農業生產中，其中有機磷農藥是全球范圍內使用量最為廣泛的農藥之一，在防治農作物病蟲害中發揮了重要作用。但是有機磷農藥具有較強的毒性，長期大量使用后易在農作物、田間土壤和水域中的殘留，引起食品安全問題和環境污染問題。

毒死蜱(chlorpyrifos，CP)是一種高效廣譜有機磷殺蟲劑，被大量用于各種農作物害蟲的防治。毒死蜱最大的優勢是對作物地下害蟲有較高的防效，目前國際上仍無可替代毒死蜱的理想農藥。另一方面，該農藥沒有諸如甲胺磷、氧樂果等農藥的高毒性，而且生產成本較低，至今仍在農業生產中廣泛應用。然而，毒死蜱屬中等毒性有機磷農藥，毒死蜱具有較高的急性毒性，影響中樞神經系統、心血管系統和呼吸系統，也能引起皮膚和眼睛過敏，長時間不合理使用會導致其在環境中的殘留量累積，對生態環境造成了很大的危害。

化學農藥的降解主要物理法、化學法和微生物法。物理法主要有吸附、光照、超聲波等方法，化學法主要有氧化劑氧化和酶制劑降解等方法，微生物法主要有利用細菌和真菌的降解方法。利用微生物降解農藥殘留具有低成本、無毒、無二次污染等有點，是應用前景最為廣泛的生物修復方法。

發明內容

本發明技術方案要解決的技術問題是提供一種降解水體中毒死蜱的深綠木霉菌。

為解決上述技術問題，本發明技術方案提供一種深綠木霉菌，所述深綠木霉菌為深綠木霉(Trichoderma atroviride)SG3403，已于2012年8月28日保藏于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCCNo.6479。

本發明的深綠木霉菌可以應用于降解毒死蜱。

可選的，所述深綠木霉菌對所述毒死蜱的耐受濃度為40mg/L-50mg/L，且所述深綠木霉菌的產孢能力在60％以上。

可選的，降解所述毒死蜱時，所述深綠木霉菌產生對氧磷酶，且所述對氧磷酶對所述毒死蜱的催化效率為5.0×10⁶kcat/Kms^-1M^-1-6.05×10⁶kcat/Kms^-1M^-1，對所述毒死蜱的酶活為2.85U/mL-3.60U/mL。

本發明還提供一種深綠木霉菌用于降解毒死蜱的方法，包括：將深綠木霉菌SG3403菌株接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上，在25℃-28℃下進行活化；在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上繁殖孢子并洗下所述孢子，制成孢子懸浮液；將所述孢子懸浮液接入馬鈴薯葡萄糖培養基中，使所述孢子的濃度為10⁵CFU/mL～10⁶CFU/mL；將所述孢子振蕩培養4天～5天，轉速為180rpm～200rpm，溫度為25℃～28℃，采用真空抽濾、無菌水沖洗、壓干菌絲兩次；將壓干菌絲0.4g～0.5g接入100mL～110mL無離水，然后加入毒死蜱，所述毒死蜱的濃度為280μg/mL～320μg/mL，在25℃～28℃、180rpm～200rpm的條件下培養120小時～125小時，避光，每隔24小時～30小時收集1.0mL～1.5mL液體進行固相微萃取-氣相色譜-質譜檢測，分析毒死蜱的水解動態。

可選的，制備所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的方法包括：