[發明專利]深綠木霉菌及其在降解毒死蜱中的應用

有效

• 申請號: 202110684510.5
• 申請日: 2021-06-21
• 公開（公告）號: CN113528352B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發明（設計）人: 唐衛東;郎博;孫佳楠;陳捷
• 申請（專利權）人: 上海大井生物工程有限公司;上海交通大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C02F3/34;B09C1/10;C12R1/885;C02F101/38;C02F103/20
• 代理公司: 上海恒慧知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 31317
• 代理人: 張寧展

1.一種深綠木霉菌用于降解毒死蜱的方法，其特征在于，包括：

將深綠木霉菌SG3403菌株接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上，在25℃~28℃下進行活化；

在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上繁殖孢子并洗下所述孢子，制成孢子懸浮液；

將所述孢子懸浮液接入馬鈴薯葡萄糖培養基中，使所述孢子的濃度為10⁵CFU/mL~10⁶CFU/mL；

將所述孢子振蕩培養4天~5天，轉速為180rpm~200rpm，溫度為25℃～28℃，采用真空抽濾、無菌水沖洗、壓干菌絲兩次；

將壓干菌絲0.4g~0.5g接入100mL~110mL無離水，然后加入毒死蜱，所述毒死蜱的濃度為280μg/mL~320μg/mL，在25℃～28℃、180rpm~200rpm的條件下培養120小時~125小時，避光，每隔24小時~30小時收集1.0mL~1.5mL液體進行固相微萃取-氣相色譜-質譜檢測，分析毒死蜱的水解動態；

所述深綠木霉菌為深綠木霉(Trichoderma atroviride) SG3403，已于2012年8月28日保藏于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No. 6479。

2.如權利要求1所述的深綠木霉菌用于降解毒死蜱的方法，其特征在于，制備所述馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的方法包括：稱取190g~200g的馬鈴薯去皮并切成小塊，加水煮沸30min~35min，用四層紗布過濾，加入15g~20g無水葡萄糖和15g~20g瓊脂粉，冷卻定容至1L，在120℃~121℃下滅菌15 min~30min。

3.如權利要求1所述的深綠木霉菌用于降解毒死蜱的方法，其特征在于，將所述孢子懸浮液以3%～5％的接種量接種于所述馬鈴薯葡萄糖培養基中。

4.如權利要求1所述的深綠木霉菌用于降解毒死蜱的方法，其特征在于，制備所述馬鈴薯葡萄糖培養基的方法包括：稱取190g~200g的馬鈴薯去皮并切成小塊，加水煮沸30min~35min，用四層紗布過濾，加入15g~20g無水葡萄糖，冷卻定容至1L，在120℃~121℃下滅菌15min~30min。

5.如權利要求1所述的深綠木霉菌用于降解毒死蜱的方法，其特征在于，所述深綠木霉菌用于降解毒死蜱時，所述深綠木霉菌菌絲與所述毒死蜱的質量濃度之比為（3.7 ~4.0）：（0.3~0.35）。

6.一種深綠木霉菌在降解毒死蜱中的應用，其特征在于，所述深綠木霉菌為深綠木霉(Trichoderma atroviride) SG3403，已于2012年8月28日保藏于北京市朝陽區北辰西路1號院3號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No. 6479。

7.如權利要求6所述的深綠木霉菌在降解毒死蜱中的應用，其特征在于，所述深綠木霉菌對所述毒死蜱的耐受濃度為40mg/L-50mg/L，且所述深綠木霉菌的產孢能力在60%以上。

8.如權利要求6所述的深綠木霉菌在降解毒死蜱中的應用，其特征在于，降解所述毒死蜱時，所述深綠木霉菌產生對氧磷酶，且所述對氧磷酶對所述毒死蜱的催化效率為5.0×10⁶kcat/Kms^-1M^-1-6.05×10⁶kcat/Kms^-1M^-1，對所述毒死蜱的酶活為2.85U/mL-3.60U/mL。