[發(fā)明專利]一種快速檢測(cè)SARS-CoV-2病毒中和抗體有效性的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110684183.3
• 申請(qǐng)日: 2021-06-21
• 公開（公告）號(hào): CN115572714A
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王潔;秦松柏;張華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇澤凱生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/85;C12N15/50;C07K14/165;G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 張勇

1.一種穩(wěn)定表達(dá)SARS-CoV-2病毒結(jié)構(gòu)蛋白的細(xì)胞株，其特征在于所述結(jié)構(gòu)蛋白為M、N、E。

2.權(quán)利要求1所述的細(xì)胞株，其特征在于通過攜帶有SARS-CoV-2病毒M、N、E結(jié)構(gòu)基因的VSV-G假病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，使用抗性篩選標(biāo)記獲得。

3.權(quán)利要求2所述的細(xì)胞株，其特征在于所述細(xì)胞為239T細(xì)胞。

4.權(quán)利要求2或3所述的細(xì)胞株，其特征在于所述VSV-G假病毒的包裝方法如下：將pHAGE2-EF1aInt-M-N-E-IRES-G418質(zhì)粒,pCMVΔR8.2質(zhì)粒,pCMV-VSV-G質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，培養(yǎng)后離心獲得。

5.權(quán)利要求2或3所述的細(xì)胞株，其特征在于所述抗性篩選標(biāo)記為G418。

6.一種生產(chǎn)SARS-CoV-2病毒樣顆粒的方法，其特征在于將SARS-CoV-2-S質(zhì)粒和Ha-CoV-2-Luc質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染權(quán)利要求1所述穩(wěn)定表達(dá)SARS-CoV-2病毒結(jié)構(gòu)蛋白的細(xì)胞株，培養(yǎng)后收集上清濃縮獲得。

7.權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述穩(wěn)定表達(dá)SARS-CoV-2病毒結(jié)構(gòu)蛋白的細(xì)胞株，通過攜帶有SARS-CoV-2病毒M、N、E結(jié)構(gòu)基因的VSV-G假病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，使用抗性篩選標(biāo)記獲得。

8.權(quán)利要求6或7所述的方法，其特征在于VSV-G假病毒的包裝方法如下：將pHAGE2-EF1aInt-M-N-E-IRES-G418質(zhì)粒,pCMVΔR8.2質(zhì)粒,pCMV-VSV-G質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，培養(yǎng)后離心獲得。

9.一種檢測(cè)SARS-CoV-2病毒中和抗體有效性的方法，其特征在于將權(quán)利要求6制備得到的SARS-CoV-2病毒樣顆粒與待測(cè)血清混合，預(yù)處理后加入HEK293T(ACE2/TMPRSS2)細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)后收集細(xì)胞，通過檢測(cè)熒光信號(hào)，分析有效性。

10.權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于具體步驟如下：

1)將收集的病毒樣顆粒與待測(cè)血清混合，進(jìn)行預(yù)處理；

2)將預(yù)處理的混合物加入HEK293T(ACE2/TMPRSS2)細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)；

3)使用緩沖液清洗細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞；

4)收集細(xì)胞，通過檢測(cè)熒光信號(hào)，分析有效性。

11.權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征在于所述SARS-CoV-2病毒樣顆粒通過將SARS-CoV-2-S質(zhì)粒和Ha-CoV-2-Luc質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染權(quán)利要求1所述穩(wěn)定表達(dá)SARS-CoV-2病毒結(jié)構(gòu)蛋白的細(xì)胞株，培養(yǎng)后離心獲得。

12.權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征在于所述穩(wěn)定表達(dá)SARS-CoV-2病毒結(jié)構(gòu)蛋白的細(xì)胞株，通過攜帶有SARS-CoV-2病毒M、N、E結(jié)構(gòu)基因的VSV-G假病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，使用抗性篩選標(biāo)記獲得。

13.權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征在于VSV-G假病毒的包裝方法如下：將pHAGE2-EF1aInt-M-N-E-IRES-G418質(zhì)粒,pCMVΔR8.2質(zhì)粒,pCMV-VSV-G質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，培養(yǎng)后離心獲得。