[發(fā)明專利]一種蛋白質提取試劑及其制備方法以及蛋白質提取方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110681642.2
• 申請日: 2021-06-19
• 公開（公告）號: CN113621020A
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設計）人: 張煜
• 申請（專利權）人: 百美特（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;G01N1/28;G01N27/447
• 代理公司: 上海中外企專利代理事務所(特殊普通合伙) 31387
• 代理人: 孫益青

本發(fā)明公開了一種蛋白質提取試劑及其制備方法以及蛋白質提取方法，蛋白質提取試劑包含質量體積比為40g/L的尿素、質量體積比為1g/L的十二烷基硫酸鈉、體積百分含量為0.1％的聚乙二醇辛基苯基醚、質量體積比為8g/L的氯化鈉、質量體積比為0.2g/L的氯化鉀、質量體積比為1.42g/L的磷酸氫二鈉、質量體積比為0.27g/L的磷酸二氫鉀、質量體積比為8g/L的乙二胺四乙酸、體積百分含量為1％的二甲基亞砜；制備方法包含將乙二胺四乙酸粉末溶解于800mL去離子水后加40g尿素溶解，加十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇辛基苯基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二甲基亞砜溶解定容至1升制得蛋白質提取試劑。

技術領域

本發(fā)明涉及蛋白質提取試劑領域，具體涉及一種蛋白質提取試劑及其制備方法以及蛋白質提取方法。

背景技術

蛋白質組學研究能夠通過構建細胞中蛋白質表達的時間及空間差異圖譜揭示生命規(guī)律，蛋白質的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分離技術是蛋白質組學研究的關鍵技術，而對蛋白組學差異分析的關鍵技術是總蛋白是否完全提取，在總蛋白的提取上，細胞裂解液是廣泛使用在蛋白分析和檢測上的一種試劑，因裂解細胞或組織的強度而被分為強、中、弱三種，分別用于不同的使用中，然而這三種細胞組織裂解液均不能夠完全提取出細胞或組織中的全蛋白，因為其條件的限制，往往會出現細胞沉淀或大量不溶于裂解液中的脂蛋白等；

近年來，蛋白提取越來越專業(yè)化，如細胞核蛋白提取、細胞膜蛋白提取、細胞漿蛋白提取和線粒體蛋白提取等，分別用于不同的科研領域，但是這些技術仍然存在不能夠完全提取出總蛋白的缺點；

RIPA提取總蛋白的方法以價格低廉、操作簡單及重復性較好等特點被廣泛應用在蛋白質組學研究中，廣泛采用的試劑有十二烷基磺酸鈉、二甲基亞砜、曲拉通等，能夠起到裂解細胞促進蛋白質溶解，防止細胞裂解液中蛋白質降解等作用，大大提高了細胞或組織中全蛋白的提取，但是，在蛋白提取前處理步驟較為繁瑣，大大增加了操作時間，增加了組織或細胞被污染的概率。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是現有的在蛋白提取前處理步驟較為繁瑣，大大增加了操作時間，增加了組織或細胞被污染的概率，本發(fā)明提供一種蛋白質提取試劑，本發(fā)明還提供一種蛋白質提取試劑的制備方法，本發(fā)明還提供一種蛋白質提取方法，能夠不需要提取前對細胞或組織進行前處理，能夠縮短提取組織或細胞中全蛋白的時間，極大的減少了蛋白質樣本被污染的可能，能夠大大的提高細胞和組織中總蛋白的提取效率，且成本較為低廉；依據一種蛋白提取試劑的使用方法進行蛋白質的提取能夠在極短的時間內完成蛋白的提取，并在短時間內的到細胞或組織中的全蛋白，添加的尿素、聚乙二醇辛基苯基醚能夠有效的裂解細胞和組織促進蛋白質溶解，添加的乙二胺四乙酸和二甲基亞砜，有助于抑制蛋白質降解，能夠而不降低蛋白活性并提取到組織或細胞中表達量較低的蛋白，用以解決現有技術導致的缺陷。

為解決上述技術問題本發(fā)明提供以下的技術方案：

第一方面，一種蛋白質提取試劑，其中，包含尿素、十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇辛基苯基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、乙二胺四乙酸、二甲基亞砜。

上述的一種蛋白質提取試劑，其中，所述尿素的質量體積比為40g/L；

所述十二烷基硫酸鈉的質量體積比為1g/L；

所述聚乙二醇辛基苯基醚的體積百分含量為0.1％；

所述氯化鈉的質量體積比為8g/L；

所述氯化鉀的質量體積比為0.2g/L；

所述磷酸氫二鈉的質量體積比為1.42g/L；

所述磷酸二氫鉀的質量體積比為0.27g/L；

所述乙二胺四乙酸的質量體積比為8g/L；

所述二甲基亞砜的體積百分含量為1％。