[發(fā)明專利]一種蛋白質(zhì)提取試劑及其制備方法以及蛋白質(zhì)提取方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110681642.2
• 申請日: 2021-06-19
• 公開（公告）號: CN113621020A
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張煜
• 申請（專利權(quán)）人: 百美特（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;G01N1/28;G01N27/447
• 代理公司: 上海中外企專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 31387
• 代理人: 孫益青

1.一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特征在于，包含尿素、十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇辛基苯基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、乙二胺四乙酸、二甲基亞砜。

2.如權(quán)利要求1所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特征在于，所述尿素的質(zhì)量體積比為40g/L；

所述十二烷基硫酸鈉的質(zhì)量體積比為1g/L；

所述聚乙二醇辛基苯基醚的體積百分含量為0.1％；

所述氯化鈉的質(zhì)量體積比為8g/L；

所述氯化鉀的質(zhì)量體積比為0.2g/L；

所述磷酸氫二鈉的質(zhì)量體積比為1.42g/L；

所述磷酸二氫鉀的質(zhì)量體積比為0.27g/L；

所述乙二胺四乙酸的質(zhì)量體積比為8g/L；

所述二甲基亞砜的體積百分含量為1％。

3.如權(quán)利要求2所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑，其特征在于，還包含濃鹽酸，采用所述濃鹽酸將所述蛋白質(zhì)提取試劑的pH值調(diào)至7.0-7.5。

4.一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

步驟A1：將乙二胺四乙酸粉末溶解于800mL的去離子水中；

步驟A2：加入40g尿素溶解；

步驟A3：依次加入十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇辛基苯基醚、氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、二甲基亞砜后溶解并定容至1000mL制得蛋白質(zhì)提取試劑。

5.如權(quán)利要求4所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑的制備方法，其特征在于，在所述步驟A3得到的所述蛋白質(zhì)提取試劑中加入濃鹽酸將pH值調(diào)至7.0-7.5，隨后加去離子水定容至1L，在使用0.2μm的濾膜進(jìn)行過濾除菌。

6.一種蛋白質(zhì)提取方法，其特征在于，包含以下步驟：

步驟B1：獲取組織，并將所述組織置于磷酸緩沖鹽溶液中洗滌三次，去除多余的血液或培養(yǎng)液；

步驟B2：以100mg的組織或細(xì)胞配1ml的蛋白質(zhì)提取試劑的比例加入離心管中，并加入研磨瓷珠置于組織勻漿器中研磨；

步驟B3：研磨完成后在冰上靜置5min，隨后離心獲得總蛋白溶解上清。

7.如權(quán)利要求6所述的一種蛋白質(zhì)提取方法，其特征在于，步驟B2中需加入3-7顆的研磨瓷珠置于組織勻漿器中以溫度為4℃的條件下研磨2min。

8.如權(quán)利要求7所述的一種蛋白質(zhì)提取方法，其特征在于，步驟B3中所述離心的條件為12000rpm下離心5min。

9.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的一種蛋白質(zhì)提取試劑在蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳、蛋白Western blot定性和/或定量以及免疫沉淀和免疫共沉淀中的應(yīng)用。