[發明專利]一種肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法

有效

• 申請號: 202110679003.2
• 申請日: 2021-06-18
• 公開（公告）號: CN113533556B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 黃曉梅;王旭;殷秋妙;丁晨紅;王威利;蘇秋權;王英;崔澤鋒
• 申請（專利權）人: 廣東省農業科學院農業質量標準與監測技術研究所
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/04
• 代理公司: 廣州知友專利商標代理有限公司 44104
• 代理人: 宣國華

1.一種肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）將氯化石蠟溶于有機溶劑，得到氯化石蠟溶液，并向其中加入血清，靜置平衡后得到底物體系；

（2）向底物體系先后加入磷酸鉀緩沖溶液、肝微粒體和NADPH酶再生體系，搖勻后得到最終反應體系，然后置于37℃水浴中振蕩反應；

（3）向步驟（2）的反應體系加入冰冷的有機溶劑終止反應，然后進行離心，取上層清液，測定氯化石蠟含量；

所述血清為雞血清，肝微粒體為雞肝微粒體。

2.根據權利要求1所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述步驟（1）血清加入的體積為氯化石蠟溶液的1~10倍。

3.根據權利要求2所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述步驟（1）中靜置平衡的過程是在4℃下進行6 ~12 h，或在室溫下進行1~3 h。

4.根據權利要求3所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述有機溶劑為乙腈。

5.根據權利要求4所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述步驟（1）中有機溶劑的體積在最終反應體系中所占比例不超過5%。

6.根據權利要求5所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述最終反應體系中氯化石蠟的濃度為0.2~1.0μg/mL。

7.根據權利要求6所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述步驟（2）中最終反應體系的總體積為0.4 ~0.6 mL。

8.根據權利要求7所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述步驟（2）中的反應時間為0.5~6 h。

9.根據權利要求8所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述步驟（3）中采用超高效液相色譜-電噴霧離子源-高分辨質譜儀（UPLC-ESI-HRMS）測定氯化石蠟含量。

10.根據權利要求9所述的肝微粒體離體代謝氯化石蠟的方法，其特征在于：所述步驟（3）中，在4℃和10000 rpm的轉速下，離心5 min。