[發明專利]褪黑激素對子代獺兔毛囊細胞凋亡率影響的研究方法

在審

• 申請號: 202110678289.2
• 申請日: 2021-06-18
• 公開（公告）號: CN113413382A
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 封洋;馬占儒;楊瑞鑫;張帆
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: A61K31/4045
• 分類號: A61K31/4045;A61P17/00;A01K67/027;G01N1/06;G01N1/28;G01N1/30;G01N1/36;G01N1/44;G01N21/64
• 代理公司: 合肥律通專利代理事務所(普通合伙) 34140
• 代理人: 鄭松林

本發明提供褪黑激素對子代獺兔毛囊細胞凋亡率影響的研究方法，涉及褪黑激素應用獺兔養殖領域，本發明包括如下研究步驟：確定褪黑激素埋植劑量；將實驗用兔分為激素埋植組以及不埋植激素的對照組，以在實驗用兔產子后，采集子代皮膚組織樣本；制作皮膚組織樣本的切片；切片的綜合處理，以及對細胞凋亡數據的測定，通過對母代埋植褪黑激素，可顯著減少了子代毛囊細胞的凋亡率，并且毛囊細胞與毛囊密度有直接關系，即，降低毛囊細胞的凋亡率可提高獺兔的毛囊密度，而毛囊密度是評定皮張的主要依據，提高毛密度可以提高獺兔皮張的價格，以增加養殖戶的經濟收益。

技術領域

本發明涉及褪黑激素應用獺兔養殖領域，尤其涉及褪黑激素對子代獺兔毛囊細胞凋亡率影響的研究方法。

背景技術

獺兔是世界著名的大型短毛兔品種，個性相當活潑好動，是一種典型的皮用型兔，生產方向是以皮為主，兼用其肉，因其毛皮酷似珍貴毛皮獸水獺，故稱為獺兔。

獺兔養殖中，對于獺兔的皮毛管理是關于養殖戶切身利益的重大事項，目前對于褪黑激素應用至獺兔養殖，來提高獺兔的毛發密度具有較高的正向作用，而現有褪黑激素的使用都是通過自身的埋植來提高毛囊密度，這樣埋植主要有兩個問題：

其一，自身埋植只能提高獺兔的次級毛囊密度，而對初級毛囊密度無影響，毛囊由初級毛囊和次級毛囊共同構成，因此如果要顯著提高毛囊密度，需要從初級和次級毛囊兩方面著手，胎兒是初級毛囊發生的主要時期，孕期埋植褪黑激素可以對胎兒的毛囊發生起作用，減少子代毛囊細胞的凋亡，提高獺兔的毛囊密度。

其二，自身埋植褪黑激素只能影響自身的毛囊密度，而在規?；B殖獺兔中，對單個體進行埋植，整體埋植數量大，成本高，且不排除獺兔個體因埋植褪黑激素不適宜，所導致的個體死亡問題。

遂，在獺兔養殖中，需求一種減少獺兔毛囊細胞的凋亡來提高獺兔毛囊密度的褪黑激素埋植方法。

發明內容

本發明的目的在于提供褪黑激素對子代獺兔毛囊細胞凋亡率影響的研究方法，以解決上述技術問題。

本發明為解決上述技術問題，采用以下技術方案來實現：

褪黑激素對子代獺兔毛囊細胞凋亡率影響的研究方法，其特征在于，包括如下研究步驟：

1)確定褪黑激素埋植劑量；

2)將實驗用兔分為激素埋植組以及不埋植激素的對照組，以在實驗用兔產子后，采集子代皮膚組織樣本；

3)制作皮膚組織樣本的切片；

4)切片的綜合處理，以及對細胞凋亡數據的測定。

所述步驟2)中激素埋植組埋植褪黑激素緩釋顆粒，不埋植激素的對照組埋植不含激素的硅膠顆粒；

所述步驟3)中切片的制作包括脫水、透明、包埋、切片、攤片和烤片；

所述步驟4)中切片的綜合處理包括蛋白酶K修復、破膜、室溫平衡、加反應液、DAPI復染細胞核、封片以及鏡檢拍照。

優選的，所述步驟1)中褪黑激素的埋植劑量為10mg。

優選的，所述步驟2)中實驗用兔為若干母兔與同一只公兔精液進行人工授精，且在人工授精后診斷出受孕的孕兔作為實驗用兔；

所述步驟2)中實驗用兔產子后，自激素埋植組以及不埋植激素的對照組中選擇數量相一致的窩仔兔，采用頸部移位法進行屠宰，屠宰后立即剝皮，于臀十字部位取2cm邊長的方形皮膚塊，用生理鹽水沖洗后立即放入多聚甲醛溶液中固定。

優選的，所述步驟3)中皮膚組織樣本的脫水為梯度脫水；

梯度脫水的具體步驟如下：

1)75％乙醇內脫水1小時；