[發(fā)明專利]一種活性和立體選擇性提高的烯鍵還原酶突變體及其編碼基因以及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110674324.3 | 申請日： | 2021-06-17 |
| 公開（公告）號： | CN113481175B | 公開（公告）日： | 2023-07-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 林金萍;魏東芝;張寶琪;杜涵 | 申請（專利權(quán)）人： | 華東理工大學(xué) |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C12N15/53;C12N1/21;C12P41/00;C12P7/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海智信專利代理有限公司 31002 | 代理人： | 余永莉 |
| 地址： | 200237 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 活性 立體 選擇性 提高 還原酶 突變體 及其 編碼 基因 以及 應(yīng)用 | ||
1.一種活性和立體選擇性提高的烯鍵還原酶突變體在催化檸檬醛制備(
第84位的酪氨酸Y突變?yōu)槔i氨酸V的烯鍵還原酶突變體Y84V，氨基酸序列如SEQ?IDNO.4所示；
第84位的酪氨酸Y突變?yōu)榱涟彼酟的烯鍵還原酶突變體Y84L，氨基酸序列如SEQ?IDNO.5所示；
第84位的酪氨酸Y突變?yōu)楫惲涟彼酙的烯鍵還原酶突變體Y84I，氨基酸序列如SEQIDNO.6所示。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括：以含有烯鍵還原酶突變體Y84V編碼基因的重組基因工程菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)后離心獲得的菌體、菌體固定化細(xì)胞、菌體超聲破碎后提取的酶、固定化酶或者純酶為催化劑，以檸檬醛為底物，以pH為7-9的緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)，在20-40℃，150-300r/min條件下反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液分離純化，獲得(
3.如權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，反應(yīng)體系中，底物濃度為20-200mM，葡萄糖濃度為30-220mM，烯鍵還原酶用量以酶活計(jì)量為1-5U/mL，葡萄糖脫氫酶以酶活計(jì)量為1.5-7.5U/mL。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述反應(yīng)進(jìn)行中，根據(jù)pH變化，通過加入Na2CO3溶液調(diào)節(jié)pH至8.5。
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