[發明專利]一種新冠病毒疫苗的表達載體及其構建方法、應用和疫苗

在審

• 申請號: 202110673867.3
• 申請日: 2021-06-17
• 公開（公告）號: CN113186223A
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 蘇小平;李銳;李偉迎;張齊
• 申請（專利權）人: 浙江格源致臻生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/50;C12N15/66;C07K14/165;A61K39/215;A61P31/14
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本發明適用于生物技術領域，提供了一種新冠病毒疫苗的表達載體及其構建方法、應用和疫苗，該表達載體的構建方法包括以下步驟：將表達新冠病毒S蛋白與NP蛋白的核苷酸序列使用2A肽進行連接，合成融合基因；在融合基因的兩端分別包含兩個酶切位點，并裝載到質粒，得到重組質粒；對重組質粒進行雙酶切，切膠回收目的基因片段；對原始的質粒進行雙酶切，切膠回收載體片段；將目的基因片段和載體片段進行連接，得到所述表達載體。本發明實施例通過同時表達冠狀病毒S蛋白受體結合區與NP蛋白，使該表達載體感染的細胞不但可以誘導抗體反應還能誘導T細胞反應，從而有效誘導體液免疫和細胞免疫，為受試者提供更強的免疫保護。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種新冠病毒疫苗的表達載體及其構建方法、應用和疫苗。

背景技術

目前全球公共衛生面臨的最大的問題是新發和再發傳染病。冠狀病毒就是這樣一類能引發嚴重疾病的傳染病毒，冠狀病毒廣泛存在于人類、哺乳動物和鳥類宿主，是一種具有包膜的RNA病毒，可以導致呼吸道、腸道、肝臟和神經系統疾病。目前的冠狀病毒種株中可致命的人畜共患傳染病病毒為嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)和中東呼吸綜合征病毒(MERS-CoV)。冠狀病毒所致的爆發性烈性傳染病具有傳染性強、潛伏期長、發病癥狀不一、致命性等特點，對國民經濟和人民生命安全造成了沉重的打擊和致命威脅。其中，新冠病毒，即2019新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)，是目前新發的一種冠狀病毒。

目前尚無批準的用于治療或預防冠狀病毒的療法。幾個國家和國際研究小組正在就各種預防和治療干預措施進行合作。正在探索的潛在途徑包括藥物治療，恢復期血漿治療，基于干擾素的療法，小分子藥物，疫苗治療。藥物治療，迄今臨床應用的抗病毒藥物種類極少，且其作用機制相似，大都是對活躍復制的病毒有效，而不能清除潛伏狀態或非復制期病毒。恢復血漿治療是一種經典的適應性免疫療法，在一個多世紀以來一直被用于許多傳染病的預防和治療，但是，存在一些涉及確定捐贈者和反復進行新冠肺炎拭子檢測方面的挑戰。疫苗是對付病毒的有效手段，但是目前還沒有有效預防SARS-CoV-2感染或任何其他人類冠狀病毒感染的疫苗。

國內外多家企業和科研機構正在研發各類新冠疫苗，主要技術路線包括RNA、DNA、腺病毒載體、滅活、減毒和重組蛋白六類，每一類都有多個候選疫苗在平行進行飽和式研發。利用已公布的新型冠狀病毒毒株，制備純化的病毒株滅活疫苗為一種制備疫苗的好思路。但是，由于制備滅火疫苗工藝復雜且對生產環境要求極高。此外，更重要的是由于滅活疫苗存在感染風險，而且本身冠狀RNA病毒變異速度快，其保護效果有限，只能起到預防作用，對于無癥狀感染者沒有作用。其他疫苗疫苗設計大多針對新冠病毒的S蛋白，主要目的是誘導抗體進而阻止病毒S蛋白和細胞ACE2受體結合進而阻斷病毒的入侵。

如果一種疫苗接種后，既能在受試者產生的中和性抗體，又能激發較好的T細胞免疫反應，那么相較于其他疫苗，該疫苗將對接種人群提供更大的短期保護力。如果還能夠激發一定程度的免疫記憶(T細胞、B細胞)，那么就有更大概率具有長期保護力。因此，目前亟待研究一種同時表達誘導體液免疫和細胞免疫的疫苗。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供一種新冠病毒疫苗的表達載體，旨在解決背景技術中提出的問題。

本發明實施例是這樣實現的，一種新冠病毒疫苗的表達載體，所述表達載體能夠同時表達新冠病毒的S蛋白和NP蛋白。

作為本發明實施例的另一種優選方案，所述表達載體所表達的蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示。

本發明實施例的另一目的在于提供一種上述新冠病毒疫苗的表達載體的構建方法，其包括以下步驟：

將表達新冠病毒S蛋白與NP蛋白的核苷酸序列使用2A肽進行連接，合成融合基因；

在融合基因的兩端分別包含兩個酶切位點，并裝載到質粒，得到重組質粒；

對重組質粒進行雙酶切，切膠回收目的基因片段；