[發(fā)明專利]基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效動(dòng)力學(xué)分析方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110671023.5
• 申請(qǐng)日: 2021-06-17
• 公開（公告）號(hào): CN113393944A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉舒;劉姝鑫;宋鳳瑞;劉志強(qiáng);鄭重;邢俊鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院長(zhǎng)春應(yīng)用化學(xué)研究所
• 主分類號(hào): G16H70/40
• 分類號(hào): G16H70/40;G01N30/88
• 代理公司: 長(zhǎng)春眾邦菁華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 周蕾

1.一種基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效動(dòng)力學(xué)分析方法，其特征在于，包括以下步驟：

以芪參顆粒中14種主要藥效成分為PK指標(biāo)，20種特征代謝標(biāo)記物以及B型利鈉肽為PD指標(biāo)，對(duì)基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析評(píng)價(jià)；

14種主要藥效成分如下：

丹參酮I、二氫丹參酮I、隱丹參酮、芒柄花素、毛蕊異黃酮、綠原酸、毛蕊花糖苷、甘草酸、甘草次酸、甘草素、異甘草素、甘草苷、異甘草苷、芹糖甘草苷；

20種特征代謝標(biāo)記物如下：

2-甲基馬尿酸、L-酪氨酸、黃嘌呤酸、吲哚-3-乳酸、犬尿喹啉酸、L-苯丙氨酸、苯乙酰甘氨酸、癸二酸、L-色氨酸、3-吲哚乙酸、3-吲哚丙酸、馬尿酸、犬尿氨酸、鵝去氧膽酸、膽酸、石膽酸、脫氧膽酸、十四碳二元酸、辛二酸、吲哚-3-羧酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效動(dòng)力學(xué)分析方法，其特征在于，其一種具體實(shí)施方式為：

步驟1、制備大鼠CHF模型；

步驟2、給與芪參顆粒藥液，連續(xù)兩周，于末次給藥后采集不同時(shí)間段的眼眶全血，放入含有肝素鈉離心管中，混勻后離心，吸取上層血漿，分裝后備用；

步驟3、B型利鈉肽含量測(cè)定

取大鼠血液于含有肝素鈉離心管中，離心得到大鼠血漿，使用BNPELISA試劑盒定量分析不同時(shí)間段眼眶采集血漿中BNP含量；

步驟4、樣品制備

將步驟2得到的血漿樣品室溫溶解后，加入內(nèi)標(biāo)溶液，混勻后加入乙腈和甲醇震蕩搖勻；離心，吸取上清，氮?dú)獯蹈?；接著加入乙?水溶液，震蕩溶解，離心，吸取上清液；

步驟5、利用UHPLC-TQ-MS/MS系統(tǒng)在MRM模式下定量分析步驟4樣品的芪參顆粒中14種主要藥效成分和20種特征代謝標(biāo)記物，應(yīng)用PKSolver計(jì)算14種主要藥效成分的PK參數(shù)并繪制藥-時(shí)曲線；

步驟6、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用Graphpad Prism5軟件，組間差異比較采用單因素方差分析方法；

步驟7、應(yīng)用Phoenix WinNonlin6.0軟件對(duì)芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)和藥效學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析評(píng)價(jià)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效動(dòng)力學(xué)分析方法，其特征在于，所述芪參顆粒是由下述質(zhì)量比的原料組成：丹參125g、黃芪125g、金銀花75g、玄參75g、甘草50g和附子50g。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效動(dòng)力學(xué)分析方法，其特征在于，步驟2中采集眼眶全血的時(shí)間段分別為：末次給藥后，0、0.08、0.25、0.50、1、1.5、2、4、6、8、12、24h。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效動(dòng)力學(xué)分析方法，其特征在于，步驟3中使用BNPELISA試劑盒定量分析0、0.08、0.25、0.50、1、1.5、2、4、6、8、12、24h眼眶采集血漿中BNP含量。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效動(dòng)力學(xué)分析方法，其特征在于，步驟4具體包括以下步驟：

將步驟2得到的血漿樣品室溫溶解后，100μL血漿中加入10μL內(nèi)標(biāo)溶液，混勻后加入200μL乙腈和200μL甲醇震蕩搖勻20min；14000rpm離心10min，吸取上清，氮?dú)獯蹈?；接著加?00μL50％乙腈-水溶液，震蕩溶解，14000rpm離心10min，吸取上清液置于套管中。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的基于代謝組學(xué)的芪參顆粒治療慢性心力衰竭的藥代動(dòng)力學(xué)-藥效動(dòng)力學(xué)分析方法，其特征在于，步驟5中PK參數(shù)包括T_1/2、T_max、C_max、AUC_0-t和AUC_0-∞。