[發明專利]一種VAV2基因缺失的腫瘤細胞系

有效

• 申請號: 202110668444.2
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN113322237B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 林東昕;吳晨;苗傳望;劉偉玲;席奕軼;劉亞宸;林皚;仲策;張少森
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院腫瘤醫院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/85;A01K67/027;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 朱萍;孟祥斌

本發明提供了一種VAV2基因缺失的腫瘤細胞系及其在篩選和/或評價/制備腫瘤治療藥物，開發腫瘤藥物靶點，制備腫瘤診斷試劑，開發腫瘤治療新技術，開發檢測腫瘤相關生物工程產品中的應用。所述VAV2基因缺失是通過Crispr/cas9敲除技術實現的，本發明的細胞系具有良好的細胞特性，并且其特性優于市售的細胞系。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種VAV2基因缺失的腫瘤細胞系及其構建方法。

背景技術

食管癌目前尚缺乏細胞模型，尤其是小鼠來源的腫瘤細胞系，本發明構建了一株小鼠來源的食管癌細胞系并命名為NCCE2，彌補該領域空白。

VAV2是一個重要的癌基因，目前有多項研究表明其影響腫瘤的增殖遷移等惡性表型，靶向VAV2可能是將來腫瘤治療領域的一個重要方向。我們通過Crispr技術獲得了VAV2基因缺失的小鼠，并且通過誘導成瘤而后繼續培養癌組織得到了穩定表達的細胞系，該細胞系具有良好的細胞特性，并且其特性優于市售的細胞系。

CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是在細菌中發現的適應性免疫反應系統(Adaptive immune system)，能有效抵抗噬菌體(Bacteriophage)等對細菌造成的損傷。在這套系統的基礎上，科學家發展出一種新的CRISPR/Cas基因組編輯技術。現在所廣泛使用的CRISPR/cas9系統是由II型CRISPR改造而來，并應用到分子生物學的相關研究中，成為一種可用于基因組編輯的分子生物學利器。CRISPR基因組編輯系統通過sgRNA上攜帶的靶點序列識別特定DNA序列，這種方式決定了CRISPR系統具有很強的特異性，由于其沒有物種的限制，已經成功在多種動物和植物中實現了基因的精確編輯。

發明內容

細胞系

本發明提供了一種食管癌細胞系，所述細胞系命名為VAV2基因缺失小鼠食管癌細胞系NCCE2，于2021年3月3日由中國典型培養物保藏中心保藏，保藏號為CCTCC NO：C202140。

生物材料樣品的保藏信息：

保藏單位：中國典型培養物保藏中心(CCTCC)；

地址：中國武漢，武漢大學；

保藏日期：2021年3月3日；

保藏編號：CCTCC NO：C202140；

分類命名：VAV2基因缺失小鼠食管癌細胞系NCCE2。

方法

本發明提供了一種構建癌細胞系的方法，所述方法包括如下步驟：

1)構建包含VAV2完整或部分基因的載體；

2)使用載體敲除模型生物的VAV2基因，獲得基因敲除的模型生物；

3)誘導基因敲除的模型生物成瘤；

4)繼續培養腫瘤組織，獲得癌細胞系。

優選地，所述癌細胞系是食管癌細胞系。

優選地，所述癌細胞系是前述保藏的NCCE2細胞系

優選地，所述VAV2完整或部分基因是gRNA，所述gRNA有引導基因編輯蛋白到特定位點進行基因編輯的功能；所述編輯包括敲除(KO)、插入、點突變。

優選地，所述載體上有Cas9的核酸序列。

優選地，所述載體上還有其他的調節元件和/或功能組分。