[發(fā)明專利]一種胃癌前狀態(tài)類器官模型的建立方法及專用培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110667659.2
• 申請(qǐng)日: 2021-06-16
• 公開（公告）號(hào): CN113234681B
• 公開（公告）日: 2022-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁霞;李園;李萍;蘇澤琦;林潔;劉旭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/09
• 分類號(hào): C12N5/09
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 劉鑫鑫

本發(fā)明公開了一種胃癌前狀態(tài)類器官模型的建立方法及專用培養(yǎng)基。本發(fā)明提供的用于構(gòu)建胃癌前狀態(tài)類器官模型的培養(yǎng)基，包括胃類器官完全培養(yǎng)基和1?甲基?3?硝基?1?亞硝基胍；1?甲基?3?硝基?1?亞硝基胍的濃度為25～200μM，優(yōu)選25～50μM，更優(yōu)選50μM。本發(fā)明提供的胃癌前狀態(tài)類器官模型的建立方法，包括使用用于構(gòu)建胃癌前狀態(tài)類器官模型的培養(yǎng)基對(duì)胃黏膜腺體進(jìn)行培養(yǎng)的步驟。本發(fā)明能夠有效模擬并支持連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察正常胃類器官向胃癌前狀態(tài)惡性轉(zhuǎn)化過程中形態(tài)結(jié)構(gòu)和基因特征的變化情況；相較于既往胃癌前狀態(tài)的動(dòng)物模型研究，極大降低了研究成本、研究周期，并且彌補(bǔ)了體外類器官模型的這一空白；胃黏膜腺體獲得量高、狀態(tài)佳、可穩(wěn)定傳代和長期培養(yǎng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種類器官模型的建立方法，尤其涉及一種胃癌前狀態(tài)類器官模型的建立方法及專用培養(yǎng)基，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

胃癌是世界第五大常見癌癥，也是癌癥相關(guān)死亡的第四大主要原因，五年生存率不到30％；2020年我國胃癌新發(fā)病例47.85萬(約占全球的43.94％)；死亡病例37.38萬(約占全球的48.62％)，疾病負(fù)擔(dān)十分嚴(yán)重。根據(jù)Correa級(jí)聯(lián)發(fā)展模式，臨床80％以上的胃癌的發(fā)生經(jīng)歷了“正常胃黏膜→萎縮性胃炎→腸上皮化生→上皮內(nèi)瘤變→胃癌”的多步驟演變，但是臨床目前仍缺乏有效阻斷和(或)逆轉(zhuǎn)這一級(jí)聯(lián)過程的有效策略。在胃腸道發(fā)育過程中，胃、小腸和結(jié)腸由一根由內(nèi)胚層細(xì)胞組成的原始腸道管分化而來，前腸發(fā)育成食道、胃和近端腸，而中腸和后腸發(fā)育為小腸和結(jié)腸。腸上皮化生是指正常的胃黏膜上皮被腸型上皮所取代，即胃黏膜中出現(xiàn)類似小腸或大腸黏膜的上皮細(xì)胞，是重要的胃癌前狀態(tài)。

胃癌病因涉及宿主及環(huán)境的復(fù)雜因素，其中飲食致癌物(主要是硝酸鹽/亞硝酸鹽類)攝入過多可增加患癌風(fēng)險(xiǎn)，開發(fā)近生理的胃癌前狀態(tài)研究模型對(duì)于篩選有效的早期預(yù)防和干預(yù)策略，降低胃癌發(fā)病率具有重要意義和價(jià)值。雖然既往已有研究應(yīng)用正常胃黏膜組織或胃癌腫瘤組織成功培養(yǎng)出了胃類器官及胃癌類器官，但是目前缺乏關(guān)于胃癌前狀態(tài)類器官培養(yǎng)方法的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種胃癌前狀態(tài)類器官模型的建立方法及專用培養(yǎng)基，通過模擬臨床飲食中的硝酸鹽和(或)亞硝酸鹽類過度攝入在體內(nèi)誘導(dǎo)正常胃黏膜惡性轉(zhuǎn)化的過程，提供一種胃癌前狀態(tài)類器官模型的建立方法及其專用培養(yǎng)基。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種用于構(gòu)建胃癌前狀態(tài)類器官模型的培養(yǎng)基。

本發(fā)明提供的用于構(gòu)建胃癌前狀態(tài)(腸上皮化生)類器官模型的培養(yǎng)基，包括胃類器官完全培養(yǎng)基和1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍(1-Methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine，MNNG)；

所述1-甲基-3-硝基-1-亞硝基胍在所述用于構(gòu)建胃癌前狀態(tài)類器官模型的培養(yǎng)基中的濃度可為25～200μM，優(yōu)選25～50μM，更優(yōu)選50μM。

上述的用于構(gòu)建胃癌前狀態(tài)類器官模型的培養(yǎng)基中，所述胃類器官完全培養(yǎng)基可為含有生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)的適于胃類器官生長的培養(yǎng)基；具體地，以質(zhì)量濃度計(jì)，所述胃類器官完全培養(yǎng)基可由下述組分組成：

50ng/mL表皮生長因子(EGF)；

100ng/mL人頭蛋白(Noggin)；

500ng/mL R-脊椎蛋白(R-Spondin)；

10nM胃泌素(Gastrin)；

1μM N-乙酰基-L-半胱氨酸(nAcetylcysteine)；

100ng/mL重組人成纖維細(xì)胞生長因子-10(FGF10)；

100ng/mL無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員3A(Wnt3A)；

10μM 4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES)；