[發明專利]一種利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法

有效

• 申請號: 202110666710.8
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN113519882B
• 公開（公告）日: 2022-10-25
• 發明（設計）人: 馮穎杰;張婷婷;彭桂新;張展;楊宗燦;劉文召;席高磊;胡少東;楚文娟;馬勝濤
• 申請（專利權）人: 河南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A24B3/12;A24B15/26;A24B15/18;C11B9/00
• 代理公司: 北京維澳專利代理有限公司 11252
• 代理人: 曾晨

1.一種利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟(1)：配制含有20g/L葡萄糖、5g/L蛋白胨、5g/L酵母粉、1g/L一水合檸檬酸的水溶液，調節pH至4.8-5，于121℃滅菌15min，接種保藏編號為CGMCC NO.21544的葡糖酸醋桿菌(Gluconacetobacter sp.)ZT-01后于30℃，150r/min的條件下恒溫震蕩培養24h，制得種子液；

步驟(2)：將煙末與提取液按照質量體積比1:(2-20)混合，30℃-120℃下回流提取0.5h-5h，過濾后取濾液進行真空旋蒸處理，滅菌后得到煙草浸提液，其中，煙末的質量的單位為g，提取液的體積的單位為mL，提取液包括乙醇和水，且提取液中乙醇和水的體積比為(1-10):20；

步驟(3)：將種子液和煙草浸提液按照體積比1:(10-1000)混合，在溫度25-40℃、50-300r/min下先攪拌發酵12-48h再靜置發酵12-72h，得到發酵煙草浸提液；

步驟(4)：過濾除去發酵煙草浸提液中的固態細菌纖維素，隨后離心取上清液，將上清液分離純化，采用不同純度的乙醇梯度洗脫，收集洗脫組分，濃縮至密度為1.145-1.155g/mL，得到濃縮液；

步驟(5)：在濃縮液中加入等體積的無水乙醇，低溫靜置一段時間后，離心取上清液，得到醇沉物；

步驟(6)：在醇沉物中加入體積為醇沉物體積的1％-50％的1,2-丙二醇，即得到煙草提取物。

2.根據權利要求1所述的利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法，其特征在于，所述步驟(2)具體如下：

煙末過篩，將過篩煙末與提取液按照質量體積比1:(2-20)混合，30℃-120℃下回流提取0.5h-5h，過濾后取濾液在120mbar真空度、55℃溫度下旋蒸2h，隨后在121℃滅菌10min得到煙草浸提液，其中，煙末的質量的單位為g，提取液的體積的單位為mL，提取液包括乙醇和水，且提取液中乙醇和水的體積比為(1-10):20。

3.根據權利要求2所述的利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法，其特征在于，所述步驟(2)具體如下：

煙末過篩，將過篩煙末與提取液按照質量體積比1:10混合，90℃下回流提取2h，過濾后取濾液在120mbar真空度、55℃溫度下旋蒸2h，隨后在121℃滅菌10min得到煙草浸提液，其中，煙末的質量的單位為g，提取液的體積的單位為mL，提取液包括乙醇和水，且提取液中乙醇和水的體積比為1:5。

4.根據權利要求1所述的利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法，其特征在于，所述步驟(3)具體如下：

將種子液和煙草浸提液按照體積比1:250混合，在溫度30℃、150r/min下先攪拌發酵36h再靜置發酵48h，得到發酵煙草浸提液。

5.根據權利要求1所述的利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法，其特征在于，所述步驟(4)具體如下：

步驟(4-1)：過濾除去發酵煙草浸提液中的固態細菌纖維素；

步驟(4-2)：對除去固態細菌纖維素的發酵煙草浸提液進行離心處理，取上清液，將上清液采用HD-20大孔樹脂分離純化，采用體積分數為10-100％的至少兩種不同純度的乙醇梯度洗脫，收集洗脫組分，真空濃縮至密度為1.145-1.155g/mL，得到濃縮液。

6.根據權利要求5所述的利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法，其特征在于，所述步驟(4-2)具體如下：

對除去固態細菌纖維素的發酵煙草浸提液在轉速8000r/min、溫度4℃條件下離心30min，將上清液采用HD-20大孔樹脂分離純化，采用體積分數為10-100％的至少兩種不同純度的乙醇梯度洗脫，收集洗脫組分，在溫度55℃、真空度為100mbar條件下濃縮至密度為1.145-1.155g/mL，得到濃縮液。

7.根據權利要求5或6所述的利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法，其特征在于，所述步驟(4-2)中采用體積分數為20％、50％和80％的乙醇梯度洗脫。

8.根據權利要求1所述的利用葡糖酸醋桿菌制備酸香型煙草提取物的方法，其特征在于，所述步驟(5)具體如下：

在濃縮液中加入等體積的無水乙醇，-20℃溫度下靜置過夜后，離心取上清液，得到醇沉物。