[發明專利]一種基于探針溶解曲線法的煙曲霉唑類耐藥分子檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202110666272.5
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN113388692A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 李姝麗;王志賢;張傲;白雪秋;閻香言;吳秀禎;盛長忠;粟艷;周澤奇
• 申請（專利權）人: 丹娜（天津）生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種檢測煙曲霉唑類耐藥相關基因突變位點的引物探針組合，其特征在于，所述引物探針組合包括第一引物對、第二引物對、第三引物對和檢測探針；

其中，第一引物對的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，用于擴增突變位點TR34和/或TR46；

第二引物對的序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，用于擴增突變位點L98H和/或Y121F；

第三引物對的序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，用于擴增突變位點T289A。

2.根據權利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述引物探針組合中檢測探針的個數為3～5個；

優選地，所述引物探針組合包含5個檢測探針，其中：

第一檢測探針的序列如SEQ ID NO.7所示，用于檢測突變位點TR34；

第二檢測探針的序列如SEQ ID NO.8所示，用于檢測突變位點TR46；

第三檢測探針的序列如SEQ ID NO.9所示，用于檢測突變位點L98H；

第四檢測探針的序列如SEQ ID NO.10所示，用于檢測突變位點Y121F；

第五檢測探針的序列如SEQ ID NO.11所示，用于檢測突變位點T289A。

3.根據權利要求1或2所述的引物探針組合，其特征在于，所述檢測探針攜帶熒光基團和淬滅基團；

優選地，所述熒光基團包括ALEX-350、Alexa Fluor 488、CY3、FAM、VIC、TET、CALGold540、JOE、HEX、CALFluorOrange560、TAMRA、CALFluorRed590、ROX、CALFluorRed610、TexasRed、CALFluorRed635、Quasar670、CY5、CY5.5、LC RED640或Quasar705中的任意一種或至少兩種的組合；

優選地，所述淬滅基團包括TAMRA、DABCYL、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Eclipse中的任意一種或至少兩種的組合。

4.一種基于探針溶解曲線法的煙曲霉唑類耐藥分子檢測試劑盒，其特征在于，所述煙曲霉唑類耐藥分子檢測試劑盒包括如權利要求1～3任一項所述的引物探針組合；

優選地，所述試劑盒還包括陰性對照品、陽性對照品、質控品和PCR反應液。

5.根據權利要求4所述的煙曲霉唑類耐藥分子檢測試劑盒，其特征在于，所述陽性對照品包括含有煙曲霉唑類耐藥突變DNA序列的質粒；

優選地，所述陽性對照品包括：含有TR34基因突變DNA序列的質粒、含有TR46基因突變DNA序列的質粒、含有L98H和Y121F基因突變DNA序列的質粒和含有T289A基因突變DNA序列的質粒；

優選地，所述含有TR34基因突變DNA序列的質粒中，TR34基因突變基因片段的序列如SEQ ID NO.12所示；所述TR46基因突變DNA序列的質粒中，TR46基因突變基因片段的序列如SEQ ID NO.13所示；所述L98H和Y121F基因突變DNA序列的質粒中，L98H和Y121F基因突變基因片段的序列如SEQ ID NO.14所示；所述T289A基因突變DNA序列的質粒中，T289A基因突變基因片段的序列如SEQ ID NO.15所示；

優選地，所述含有TR34基因突變DNA序列的質粒、含有TR46基因突變DNA序列的質粒、含有L98H和Y121F基因突變DNA序列的質粒和含有T289A基因突變DNA序列的質粒的質量比為1:(0.5～1.5):(0.5～1.5):(0.5～1.5)，優選為1:1:1:1。