[發明專利]豬圓環病毒2型LAMP檢測引物組及試劑盒

在審

• 申請號: 202110665709.3
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN113337641A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 俞國華;楊小燕;戴愛玲;范克偉;劉建奎;黃翠琴;楊守深;尹會方;李曉華;王鑫;包銀莉
• 申請（專利權）人: 龍巖學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

本發明公開了豬圓環病毒2型LAMP檢測引物組及試劑盒，豬圓環病毒2型LAMP檢測引物組包括6條引物，具體核苷酸序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示。豬圓環病毒2型LAMP檢測試劑盒包含上述引物組外，還包含Bst DNA聚合酶、dNTP、MgSO₄、Betaine、10Ｘ LAMP反應緩沖液、HNB、陽性對照質粒等成分。本發明試劑盒具有靈敏度高、特異性好、反應時間短、結果可視化、配套儀器簡單等一系列優點，不僅適用于大型養殖單位和高端實驗室，也適用于廣大中小養殖單位和普通實驗室。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及豬圓環病毒2型LAMP檢測引物組及試劑盒。

背景技術

豬圓環病毒(Porcine circovirus，PCV)屬于圓環病毒科(Circoviridae)圓環病毒屬，是單股DNA病毒，無囊膜。根據其發現的先后、致病性和核酸序列的差異可分為2型，即PCV1和PCV2。PCV1無致病型，而PCV2具有致病型。

豬圓環病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是單股負鏈環狀無囊膜的DNA病毒，其基因組全長1.7kB。PCV2感染后主要引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)，能夠與許多病原體并發或繼發感染，在豬機體內引起免疫抑制。

自1991年加拿大豬群中首次暴發PCV2以后，在世界各地豬群中廣泛流行。PCV2相關性疾病(Porcine circovirus associated disease，PCVAD)是一組復雜的、多因子疾病，除了引起PMWS以外，常發的還有豬皮炎與腎病綜合癥(Porcine dermatitis andnephropathy syndrome，PDNS)等，給世界養豬業造成了巨大的經濟損失。

PCV2的診斷方法有臨床診斷、病毒分離鑒定、酶聯免疫吸附實驗(ELISA)、普通PCR和熒光定量PCR等，其中：臨床診斷無法確診，病毒分離鑒定太過復雜繁瑣，ELISA檢測只有在動物產生抗體后才能檢測出來從而導致檢測時間延后，普通PCR檢測需要在擴增完成后通過電泳才能獲得檢測結果，而熒光定量PCR檢測需要使用昂貴的熒光定量PCR儀從而限制了該方法的使用范圍。

LAMP(Loop Mediated Isothermal Amplification，環介導等溫基因擴增技術)是一種新型的核酸擴增技術，在2000年由日本科學家發明。該技術具有靈敏度高、特異性好、反應時間短、結果可視化、配套儀器簡單等一系列優點。利用該技術開發的產品，具有以下兩個優點：(1)配套儀器成本低：一個普通水浴鍋即可完成檢測反應；(2)結果可視化，產品使用范圍大大擴展：不僅大型養殖單位和高端實驗室可以使用，廣大中小養殖單位和普通實驗室也可以使用。

發明內容

為了克服傳統PCV2檢測方法固有的缺點，本發明的目的在于提供豬圓環病毒2型LAMP檢測引物組及試劑盒。

本發明是通過如下技術方案實現的：

首先，選取PCV2病毒基因組的保守序列，設計了針對PCV2病毒的LAMP檢測引物組，具體核苷酸序列如下：

SEQ ID NO.1(PCV2-F3):5′-gctgtgagtaccttgttggag-3′

SEQ ID NO.2(PCV2-B3):5′-acaaccacttcttcaccatg-3′

SEQ ID NO.3(PCV2-FIP):5′-tgcattttcccgctcactttcttgcagagcagcaccctgtaac-3′