[發明專利]一種針對中華絨螯蟹螺原體的特異性卵黃抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110665691.7
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN113527480B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 曹曉慧;劉鴻麗;顧偉;王文;孟慶國
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C07K16/02;A61K39/40;A61P31/04
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹翠珍

本發明公開了一種針對中華絨螯蟹螺原體的特異性卵黃抗體及其制備方法和應用，所述抗體為抗S.eriocheiris的特異性IgY抗體，是由破碎后的螺原體注射進母雞體內，從雞蛋的卵黃中分離并純化得到的特異性抗體。該特異性抗體可通過飼料飼喂或注射等方式應用于中華絨螯蟹抵抗S.eriocheiris的感染中，結果證明與現有的治療中華絨螯蟹顫抖病的方法相比，本發明的方法對環境無污染、針對性強、效果顯著。本發明成功地證明了抗S.eriocheiris特異性IgY在中華絨螯蟹抵抗S.eriocheiris感染過程中的潛在作用，并可以應用于水產養殖中以提高中華絨螯蟹的產量和漁民的收入，促進中華絨螯蟹養殖產業的發展。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種針對中華絨螯蟹螺原體的特異性卵黃抗體及其制備方法和應用。

背景技術

中華絨螯蟹俗稱河蟹，是中國水產養殖業中的重要養殖品種之一，隨著國際和國內市場需求的迅速增加，其產業也迅速發展，以滿足市場的需要。隨著中華絨螯蟹產業的集約化發展，各種細菌、病毒、寄生蟲或者理化因素導致的疾病暴發對其產業的可持續發展造成了嚴重的制約，其中由中華絨螯蟹螺原體(Spiroplasma?eriocheiris)引起的顫抖病是對中華絨螯蟹養殖產業最具破壞性的疾病，目前對于該疾病的致病機理、檢測和防治工作已經取得了一系列的研究成果。目前該疾病的治療還是主要依靠土霉素等抗生素的使用，但是，抗生素等化學藥物的濫用可能會導致藥物殘留、耐藥菌產生、環境污染以及水生動物免疫系統損傷等一系列問題。而耐藥菌的傳播會大大減少可用防治措施的選擇，并增加治愈難度和導致感染引起的死亡，因此，迫切需要有效且無污染的抗生素替代品。

目前，還沒有關于在中華絨螯蟹中使用特異性IgY對抗S.eriocheiris感染的研究。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是驗證IgY在中華絨螯蟹防治S.eriocheiris感染中的作用，以預期用特異性抗S.eriocheiris?IgY防治中華絨螯蟹顫抖病，進而增加中華絨螯蟹在感染S.eriocheiris過程中的存活率，以提高中華絨螯蟹的產量和漁民收入。因此，本發明提供了一種針對中華絨螯蟹螺原體的特異性卵黃抗體及其制備方法和應用。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種針對中華絨螯蟹螺原體的特異性卵黃抗體，所述抗體為抗S.eriocheiris的特異性IgY抗體，是由破碎后的螺原體注射進母雞體內，從雞蛋的卵黃中分離并純化得到的特異性抗體。

一種針對中華絨螯蟹螺原體的特異性卵黃抗體的制備方法，包括以下步驟：

步驟1)將S.eriocheiris在R2培養基中培養24h后離心去上清，并用PBS重懸；

步驟2)將經步驟1)重懸后的S.eriocheiris進行超聲破碎，并于20℃保存備用；

步驟3)對母雞進行肌肉注射，注射1mL?200～400μg/mL經步驟2)破碎后的S.eriocheiris，生產特異性抗體IgY；

步驟4)對母雞進行3次注射，間隔2周，每天收集雞蛋，直至第九周，提取雞蛋卵黃，從卵黃中分離出IgY并純化，即得。

一種針對中華絨螯蟹螺原體的特異性卵黃抗體在抑制S.eriocheiris生長方面的應用。

一種針對中華絨螯蟹螺原體的特異性卵黃抗體在抑制S.eriocheiris生長方面的應用，包括以下步驟：

步驟a)從注射了200～400μg/mL的S.eriocheiris的雞卵黃中分離出IgY并純化；

步驟b)將步驟a)得到的IgY以滴度為1:1～30000的比例進行稀釋，得到特異性IgY；