[發明專利]一種提取、分離、鑒定和驗證黃酒中苦味肽的方法

有效

• 申請號: 202110665333.6
• 申請日: 2021-06-16
• 公開（公告）號: CN113390994B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 于海燕;郭偉;謝靜茹;田懷香;陳臣;王曉雨;姚文倩;廖晗雪
• 申請（專利權）人: 上海應用技術大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/06;G01N30/14;G01N33/14
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 徐俊

1.一種黃酒中苦味肽，其特征在于，所述黃酒中苦味肽的氨基酸序列為Leu-Pro-Thr-Leu。

2.一種權利要求1所述的黃酒中苦味肽的分離方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1）超濾膜分離：以花雕酒為研究對象，采用膜超濾法對其進行處理，由截留分子量5KD和3KDa的超濾膜將花雕酒酒液分離為I-1、I-2、I-3三個組分，其中I-1分子量為≥5KDa，I-2分子量為3～5KDa，I-3分子量為≤3KDa；

2）凝膠過濾層析：通過葡聚糖凝膠G-15對1)中得到的超濾組分I-3進行分離，在紫外檢測器吸收波長220nm處得到八個吸收峰，分別命名為II-1、2、3、4、5、6、7、8，選擇II-7組分進一步分析鑒定；

3）高效液相色譜分析：對2)中確定的關鍵苦味肽組分II-7進行高效液相色譜測定，驗證了凝膠分離所得的II-7肽組分在220nm波長下具有紫外吸收，而且凝膠過濾層析的分離效果尚可，收集到的II-7肽組分可以用于下一步的結構鑒定；

4）結構鑒定：通過超高效液相色譜-四級桿-飛行時間質譜對3)中確定的關鍵苦味肽組分Ⅱ-7的氨基酸序列進行了鑒定；

液相條件：洗脫液A為0 .1％乙腈水溶液，洗脫液B為0 .1％甲酸水溶液，洗脫程序為0-2min采用100％B；2-3min采用10％A和90％B，3-10min采用100％A；色譜柱為BEH C18色譜柱，5cm×2 .1mm×1 .7μm，柱溫45℃；進樣量10μL，流速為0 .3mL/min；

質譜條件：ESI+電離模式，離子源溫度100℃；脫溶劑氣化溫度400℃；毛細管電壓3.2KV；錐孔電壓20KV，錐孔流速50L/h ,粒子能量1V，碰撞能量6V和20V；檢測電壓1700V；掃描時間1s，掃描范圍20-10000m/z；

質譜鑒定在m/z 443附近的質譜豐度最強，對這個質譜峰進行碰撞誘導裂解，并進一步對照系統自帶的Masslynx中的Biolynx對肽序列進行自動數據檢索，最終得到一個分子量為508.5的肽序列，其序列為Leu-Pro-Thr-Leu。