[發明專利]一種基于酶聯顯色法檢測乙酸根含量的方法及其應用

有效

• 申請號: 202110661731.0
• 申請日: 2021-06-15
• 公開（公告）號: CN113358639B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 孔令明;張雷;陳知雨;徐瑜聰
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

1.琥珀酰輔酶A: 乙酸CoA轉移酶在乙酸根檢測中的應用，其特征在于，所述琥珀酰輔酶A: 乙酸CoA轉移酶采用基因工程手段獲得，具體包括：通過從醋酸桿菌中克隆獲得編碼琥珀酰輔酶A: 乙酸CoA轉移酶的基因，將上述基因與表達載體結合，導入宿主內表達即得。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述表達載體為病毒載體、質粒或人工染色體中的任意一種或多種。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述表達載體為質粒。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于，所述表達載體為pET-30a質粒。

5.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述宿主包括細菌和真核細胞。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于，所述宿主選自埃希氏大腸桿菌、芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、里氏木霉和草酸青霉。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，所述埃希氏大腸桿菌為大腸桿菌Rosetta。

8.一種基于酶聯顯色法檢測乙酸根的產品，其特征在于，所述產品至少包括琥珀酰輔酶A: 乙酸CoA轉移酶、琥珀酰輔酶A和酰基輔酶A氧化酶；

所述產品還包括用于檢測H₂O₂的產品。

9.如權利要求8所述的產品，其特征在于，所述用于檢測H₂O₂的產品為基于分光光度法的過氧化氫含量檢測試劑盒。

10.如權利要求8所述產品，其特征在于，所述基于酶聯顯色法檢測乙酸根的產品為檢測試劑盒。

11.如權利要求10所述產品，其特征在于，所述檢測試劑盒包括試劑A和試劑B；

其中，所述試劑A包括aarC、succinyl-CoA、4-APP、MgCl₂、NaCl、KCl和Tris-HCl緩沖液；

所述試劑B包括TOOS、POD、ACOD、Triton X-100和Tris-HCl緩沖液；

所述檢測試劑盒還包括標準品。

12.一種基于酶聯顯色法檢測乙酸根含量的方法，其特征在于，所述方法包括采用權利要求8-11任一項所述基于酶聯顯色法檢測乙酸根的產品進行檢測。

13.如權利要求12所述方法，其特征在于，所述檢測方法包括：

向待測樣品中加入琥珀酰輔酶A: 乙酸CoA轉移酶、琥珀酰輔酶A和酰基輔酶A氧化酶，產生H₂O₂，通過對H₂O₂進行檢測進而間接測定乙酸根含量。

14.如權利要求 13所述方法，其特征在于，所述對H₂O₂進行檢測采用基于分光光度法的過氧化氫含量檢測試劑盒進行檢測。

15.權利要求8-11任一項所述產品或權利要求12-14任一項所述方法在乙酸根檢測中的應用。

16.如權利要求15所述應用，其特征在于，所述應用領域包括食品、輕紡、塑料、醫療、橡膠、染料、油漆領域。

17.如權利要求16所述應用，其特征在于，所述食品包括葡萄酒、果汁、醋、啤酒、硬質干酪、蛋黃醬或酸奶。

18.如權利要求15所述應用，其特征在于，當待測物為固體時，需要將固體樣品在蒸餾水中進行粉碎、勻漿操作，使固體樣品最終呈現液態后進行測定。

19.如權利要求18所述應用，其特征在于，將制備得到的勻漿液進行過濾后再進行測定。