[發(fā)明專利]一種基于酶聯(lián)顯色法檢測乙酸根含量的方法及其應用

有效

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• 申請日: 2021-06-15
• 公開（公告）號: CN113358639B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發(fā)明（設計）人: 孔令明;張雷;陳知雨;徐瑜聰
• 申請（專利權(quán)）人: 山東大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

本發(fā)明提供一種基于酶聯(lián)顯色法檢測乙酸根含量的方法及其應用，屬于化合物檢測技術(shù)領域。本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，琥珀酰輔酶A:乙酸CoA轉(zhuǎn)移酶可以將琥珀酰輔酶A和乙酸根作為底物，形成乙酰輔酶A和琥珀酸，后續(xù)將乙酰輔酶A在酰基輔酶A氧化酶作用下氧化，從而生成烯酰基輔酶A和H₂O₂。繼而利用過氧化氫(H₂O₂)含量檢測試劑盒測定H₂O₂，從而間接測定出乙酸含量，該方法檢測靈敏度較高，同時檢測成本低，具有良好的實際應用之價值。

技術(shù)領域

本發(fā)明屬于化合物檢測技術(shù)領域，具體涉及一種基于酶聯(lián)顯色法檢測乙酸根含量的方法及其應用。

背景技術(shù)

公開該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

乙酸是大宗化工產(chǎn)品，是重要的有機酸之一，主要可用于生產(chǎn)乙酸乙烯、乙酸酐、乙酸酯和乙酸纖維素等，是農(nóng)藥、醫(yī)藥、織物印染、合成纖維的重要原料之一。如聚乙酸乙烯酯可用來制備薄膜和粘合劑，也是合成纖維維綸的原料。乙酸還可用來合成乙酐、丙二酸二乙酯、乙酰乙酸乙酯、鹵代乙酸等，可制造藥物如阿司匹林、還可以用于生產(chǎn)乙酸鹽等。乙酸還是優(yōu)良的有機溶劑，在化工、輕紡、塑料、醫(yī)療、橡膠、染料以及油漆工業(yè)等眾多領域有著廣泛的應用。

在食品工業(yè)中，乙酸可用作酸化劑，增香劑和香料。用水將乙酸稀釋至4-5％濃度，再添加各種調(diào)味劑，可制成食用醋。作為酸味劑，乙酸存在于罐頭、冷飲(如葡萄酒、果汁、酸奶、啤酒等)、糖果、焙烤食品、硬質(zhì)干酪、布丁類、膠媒糖、調(diào)味品等。在生物實驗中，實驗所用生物樣品中多含乙酸。此外，乙酸還具有防腐劑的作用。

在上述應用過程中，需要對乙酸進行含量檢測，從而監(jiān)測并控制乙酸含量。目前，常用的乙酸根測定方法通常選用離子色譜儀等進行離子檢測，雖然具有測量準確等優(yōu)點，但離子色譜儀等設備價格高昂，難以大規(guī)模推廣使用。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明提供一種基于酶聯(lián)顯色法檢測乙酸根含量的方法及其應用。本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn)，琥珀酰輔酶A:乙酸CoA轉(zhuǎn)移酶可以將琥珀酰輔酶A和乙酸根作為底物，形成乙酰輔酶A和琥珀酸，后續(xù)將乙酰輔酶A在酰基輔酶A氧化酶作用下氧化，從而生成烯酰基輔酶A和H₂O₂。繼而利用過氧化氫(H₂O₂)含量檢測試劑盒測定H₂O₂，從而間接測定出乙酸含量，該方法檢測靈敏度較高，同時極大降低檢測成本，具有良好的實際應用之價值。

具體的，本發(fā)明涉及以下技術(shù)方案：

本發(fā)明的第一個方面，提供琥珀酰輔酶A:乙酸CoA轉(zhuǎn)移酶在乙酸根檢測中的應用。

在本發(fā)明的一個具體實施方式中，所述琥珀酰輔酶A:乙酸CoA轉(zhuǎn)移酶可以采用基因工程手段獲得，具體包括：通過從醋酸桿菌中克隆獲得編碼琥珀酰輔酶A:乙酸CoA轉(zhuǎn)移酶的基因，將上述基因與表達載體結(jié)合，導入宿主內(nèi)表達即得。

本發(fā)明的第二個方面，提供一種基于酶聯(lián)顯色法檢測乙酸根的產(chǎn)品，所述產(chǎn)品至少包括琥珀酰輔酶A:乙酸CoA轉(zhuǎn)移酶、琥珀酰輔酶A和酰基輔酶A氧化酶。

所述產(chǎn)品還包括用于檢測H₂O₂的產(chǎn)品；所述用于檢測H₂O₂的產(chǎn)品可以使用現(xiàn)有已知產(chǎn)品，在本發(fā)明的一個具體實施方式中，所述用于檢測H₂O₂的產(chǎn)品基于分光光度法的過氧化氫含量檢測試劑盒。

上述基于酶聯(lián)顯色法檢測乙酸根的產(chǎn)品可以是檢測試劑盒。

本發(fā)明的第三個方面，提供一種基于酶聯(lián)顯色法檢測乙酸根含量的方法，所述方法包括：