[發明專利]一種基于量子點熒光微球探針檢測氯霉素的方法

在審

• 申請號: 202110660260.1
• 申請日: 2021-06-15
• 公開（公告）號: CN113358861A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 湯軼偉;劉歡;高雪;劉秀英;張福源;于志鵬;呂長鑫
• 申請（專利權）人: 渤海大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 沈陽智龍專利事務所(普通合伙) 21115
• 代理人: 宋鐵軍

1.一種基于量子點熒光微球探針檢測氯霉素的方法，其特征在于，步驟如下：

(1)制備羧基化Mn-ZnS量子點熒光納米微球；所述羧基化Mn-ZnS量子點熒光納米微球直徑為4±0.5nm；

(2)利用步驟(1)制備的羧基化Mn-ZnS量子點熒光納米微球加入氯霉素單克隆抗體，制備Mn-ZnS量子點納米微球-氯霉素熒光探針；

(3)利用氯霉素-牛血清白蛋白偶聯物制備檢測線T線，利用羊抗鼠二抗制備質控線C線，噴涂在硝酸纖維素膜上，由在硬墊板上依次搭接并粘貼玻璃纖維樣品墊、設置有T線和C線的硝酸纖維素膜和吸水墊組裝起來獲得層析試紙層；再剪成4-5毫米寬的試紙條；

(4)分別將步驟(2)所得的納米微球-氯霉素熒光探針5-7微升與待測樣品加入到酶標板孔中；于37℃烘箱內孵育20-25min后，即得D液；

(5)向步驟(4)的含有D液的酶標板孔中插入步驟(3)制備的層析試紙條，玻璃纖維樣品墊一端浸入到酶標板孔中的液體中，待液體開始向硝酸纖維素膜層析時開始計時，4-5min后置于紫外分析儀下觀察，通過T線顏色變化進行定量判斷。

2.根據權利要求1所述的一種基于量子點熒光微球探針檢測氯霉素的方法，其特征在于：步驟(1)所述羧基化Mn-ZnS量子點熒光納米微球，由以下步驟的方法制得：

將ZnSO₄、MnCl₂和谷胱甘肽溶于超純水中，用0.01mol/L的NaOH調節溶液pH值為11，通入氮氣條件下磁力攪拌30-40min后加入Na₂S溶液，繼續攪拌20-30min后，將溫度升至55-60℃時停止通入氮氣，繼續反應2-4小時；ZnSO₄、MnCl₂和谷胱甘肽的摩爾比為2.5：0.1：4-6；MnCl₂與Na₂S的摩爾比為1：24-26；MnCl₂與超純水的摩爾體積比為0.01：45-55(mmol：mL)；

反應結束后，加入等體積的乙醇使合成的量子點沉淀，在10000-12000rpm轉速下離心分離，去除液體，獲得產物，產物用去離子水洗滌大于等于5次去除未反應的原料，產物在低溫干燥后備用。

3.根據權利要求1所述的一種基于量子點熒光微球探針檢測氯霉素的方法，其特征在于：步驟(2)所述制備的羧基化Mn-ZnS量子點熒光納米微球和氯霉素單克隆抗體，制備Mn-ZnS量子點納米微球-氯霉素熒光探針，由包括以下步驟的方法制得：

取Mn-ZnS量子點加入含有磷酸鹽緩沖液的棕色小瓶中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽溶液和N-羥基琥珀酰亞胺溶液，充分混合后迅速將小瓶置于超聲清洗器中超聲30-40min，然后加入氯霉素單克隆抗體，室溫條件下在磁力攪拌的作用下反應90-100min獲得Mn-ZnS QDs-CAP偶聯物的Mn-ZnS量子點納米微球-氯霉素熒光探針，4℃保存備用；Mn-ZnS量子點、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽與N-羥基琥珀酰亞胺的質量比為4-6：18：15；Mn-ZnS量子點與磷酸鹽緩沖液的質量體積比為0.5：1-1.5mg：mL；Mn-ZnS量子點與氯霉素單克隆抗體的質量比為9-11：1。