[發明專利]一種基于量子點免疫熒光檢測試劑盒制備方法

有效

• 申請號: 202110658191.0
• 申請日: 2021-06-15
• 公開（公告）號: CN113252909B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 黃磊;肖瀟;蔡偉炎
• 申請（專利權）人: 南京申基醫藥科技有限公司;新疆申基生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/533;G01N33/531;G01N21/64
• 代理公司: 南京中軟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32466
• 代理人: 鄭燕飛

本發明涉及生物技術相關技術領域，通過在玻璃纖維膜的上表面從左到右依次設置有KIM?檢測線、NGAL檢測線、mALB檢測線和質控線；玻璃纖維膜的外部套接設置有卡殼；卡殼的左側上表面開設加工有加樣孔；KIM?檢測線和NGAL檢測線、NGAL檢測線和mALB檢測線之間的距離為4至6毫米；mALB檢測線和質控線之間的距離為3至4毫米；在玻璃纖維膜正上方的所述卡殼上表面位置開設加工有觀測口；制備過程經過溶液配制以及微球活化處理并進行不同抗體偶聯液配制再將其附著到對應檢測線上等處理步驟，本發明能夠提供一種穩定性好、量子點的熒光壽命長、特異性強以及靈敏度高的基于量子點免疫熒光檢測試劑盒及其制備方法。

技術領域

本發明屬于生物技術相關技術領域，具體涉及一種基于量子點免疫熒光檢測試劑盒制備方法。

背景技術

腎損傷疾病如急性腎功能衰竭或慢性腎功能衰竭，可由各種不同的原因如疾病，損傷等引起，急性腎損傷（英文簡稱AKI）是指腎功能的快速喪失，目前臨床上通過尿量減少，血清肌酐上升和尿素氮升高來診斷急性腎損傷，但有一定的延遲性，急性腎損傷（英文簡稱AKI）的人群發病率高，全球每年約有兩百萬人死于AKI，危重癥患者，尤其是老年人近年AKI的發生率日益增加，主要原因在于無法早期診斷AKI，錯過了最佳的治療“時間窗”，為了提高診斷水平，早期發現急性腎損傷的生物標志物如腎損傷分子-1(KIM-1)，中性粒細胞明膠酶脂質相關運載蛋白（NGAL），尿微量白蛋白（mALB）最近被引入臨床實驗。

腎損傷分子-1（kidneyinjurymolecule-1，KIM-1）是1型跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白基因超家族；在正常的腎組織中檢測不到KIM-1，而在人類和嚙齒類動物發生腎損傷（缺血或中毒）時，其高表達于近端腎小管；KIM-1的胞外域非常穩定，能在尿液中保存較久，因此在腎損傷時，可以在病理組織以及尿液中檢測到；KIM-1對于缺血性或腎毒性腎損傷更為特異，不受氮質血癥、尿路感染或慢性腎病的影響；KIM-1可作為一種檢測早期腎損傷的可靠分子標志物，在臨床上具有廣闊的應用前景。

中性粒細胞明膠酶脂質相關運載蛋白（NGAL）是1993年在研究中性粒細胞明膠酶時發現的一種相對分子量為25000的蛋白質，在正常情況下表達較低，但在各種原因導致的腎損傷時，NGAL大量表達于缺血的近端腎小管上皮細胞；研究發現，對于心臟手術后出現AKI的患者，血液和尿液中的NGAL和術前相比明顯升高，并且和患者腎損傷程度直接相關；不僅如此，在腎毒性的相關性研究中也發現，NGAL可以早期預測腎損傷的程度。

尿中出現了微量蛋白，稱尿微量白蛋白（mALB）；腎臟每天需要將血液中的代謝物過濾掉，腎臟濾過膜的孔徑為5.5nm，只允許小分子物質水、電解質（鉀、鈉、氯）和代謝廢物（肌酐、尿素氮、尿酸等）通過；而血液中的白蛋白直徑為7.2nm，不能通過濾過孔，所以尿中沒有蛋白質。

目前早期診斷AKI面臨的挑戰是缺乏敏感性高、特異性好，在腎損傷的早期階段能準確診斷AKI的標志物；現有臨床實踐中用于診斷AKI的標志物是血肌酐和尿量，但上述兩個指標存在局限性：血肌酐水平要待腎功能喪失超過一大半時才出現升高，且受諸多非腎損傷因素（如藥物、病人營養狀態、機體肌肉量等）影響，不是AKI早期敏感指標；每小時尿量的精確測定只有在留置導尿管的病人中才能進行，且受利尿劑用量和血容量波動等因素影響大，普適性低且特異性不高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種穩定性好、抗漂白能力強、量子點的熒光壽命長、特異性強以及靈敏度高的基于量子點免疫熒光檢測試劑盒及其制備方法。

下面關于后續技術方案表述中涉及的專業名詞解釋如下：

KIM-1：腎損傷分子-1；

NGAL：中性粒細胞明膠酶相關性脂質運載蛋白；

mALB：尿微量白蛋白；

AKI：急性腎損傷；

PB：磷酸緩沖液；