[發明專利]一種檢測SARS-CoV-2變異毒株核酸的方法及其應用

有效

• 申請號: 202110653776.3
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號: CN113249522B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 楊利敏;劉文軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

1.一種用于檢測核酸分子中的核苷酸突變的探針，為探針甲或探針乙；

對于所述探針甲來說，所述核苷酸突變為涉及核苷酸G的突變，即突變前為核苷酸G或突變后為核苷酸G；所述探針為正向雜交探針，是基于所述核苷酸突變設計的，其中具有對應于所述核苷酸突變的核苷酸G，將其命名為目標G；所述探針標記有熒光染料，且所述熒光染料標記在目標G的相鄰核苷酸上；

對于所述探針乙來說，所述核苷酸突變為涉及核苷酸C的突變，即突變前為核苷酸C或突變后為核苷酸C；所述探針為反向雜交探針，是基于所述核苷酸突變設計的，其中具有對應于所述核苷酸突變的核苷酸G，將其命名為目標G；所述探針標記有熒光染料，且所述熒光染料標記在目標G的相鄰核苷酸上；

所述探針甲或所述探針乙中，不具有熒光淬滅基團。

2.一種用于檢測核酸分子中的核苷酸突變的引物探針組，包括權利要求1所述探針和特異引物對；所述特異引物對的靶序列包括所述探針對應的序列。

3.一種用于鑒定核酸分子中的核苷酸突變的熒光PCR方法，包括如下步驟：以供試DNA為模板，采用權利要求2所述引物探針組進行PCR擴增；根據擴增曲線鑒定核酸分子中的核苷酸突變；所述方法用于非疾病診斷與治療。

4.一種用于鑒定核酸分子中的核苷酸突變的熒光PCR方法，包括如下步驟：以供試RNA為模板，采用權利要求2所述引物探針組在含有反轉錄酶的體系中進行PCR擴增；根據擴增曲線鑒定核酸分子中的核苷酸突變；所述方法用于非疾病診斷與治療。

5.權利要求1所述探針或權利要求2所述引物探針組在制備試劑盒中的應用；所述試劑盒用于鑒定核酸分子中的核苷酸突變。

6.一種用于檢測新型冠狀病毒E484位點變異的試劑盒，包括特異性探針；所述特異性探針是基于新型冠狀病毒E484位點變異設計的，其中具有對應于新型冠狀病毒E484位點變異的核苷酸G，將其命名為目標G；所述特異性探針標記有熒光染料，且所述熒光染料標記在目標G的相鄰核苷酸上；所述探針中，不具有熒光淬滅基團。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括特異引物對；所述特異引物對的靶序列包括所述特異性探針對應的序列。

8.如權利要求6或7所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括通用探針；所述通用探針是基于新型冠狀病毒的保守區設計的，其中具有核苷酸G并且在該核苷酸G的相鄰核苷酸上標記有熒光染料。

9.(a)或(b)或(c)或(d)在制備用于檢測新型冠狀病毒E484位點變異的試劑盒中的應用；

(a)權利要求6中所述的特異性探針；

(b)權利要求6中所述的特異性探針和權利要求8中所述的通用探針；

(c)權利要求6中所述的特異性探針和權利要求7中所述的特異引物對；

(d)權利要求6中所述的特異性探針和權利要求8中所述的通用探針和權利要求7中所述的特異引物對。

10.(a)或(b)或(c)或(d)在制備用于檢測新型冠狀病毒E484變異株的試劑盒中的應用；

(a)權利要求6中所述的特異性探針；

(b)權利要求6中所述的特異性探針和權利要求8中所述的通用探針；

(c)權利要求6中所述的特異性探針和權利要求7中所述的特異引物對；

(d)權利要求6中所述的特異性探針和權利要求8中所述的通用探針和權利要求7中所述的特異引物對。