[發(fā)明專利]一種基于斑馬魚模型對莨菪類藥物進(jìn)行毒性評價(jià)的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110652953.6
• 申請日: 2021-06-11
• 公開（公告）號: CN113413471A
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王斌杰;陳天逸;汪安利;吳元釗;姚偉宣;王繼業(yè);許中石
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江警察學(xué)院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 杭州知閑專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33315
• 代理人: 張勛斌

本發(fā)明公開了一種基于斑馬魚模型對莨菪烷烴類藥物進(jìn)行毒性評價(jià)的方法，包括：(1)配制莨菪類藥物溶液；(2)采用所述的莨菪類藥物溶液對斑馬魚胚胎、斑馬魚幼魚和斑馬魚成魚進(jìn)行處理，獲得毒性反應(yīng)結(jié)果；所述毒性反應(yīng)結(jié)果包括斑馬魚幼魚胚胎發(fā)育毒性結(jié)果，斑馬魚幼魚行為學(xué)毒性結(jié)果和斑馬魚成魚行為學(xué)毒性結(jié)果；(3)根據(jù)所述毒性反應(yīng)結(jié)果得到莨菪類藥物的毒性數(shù)據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于毒物分析領(lǐng)域，具體涉及一種基于斑馬魚模型對莨菪烷烴類藥物進(jìn)行毒性評價(jià)的方法。

背景技術(shù)

莨菪烷類生物堿是一類具有較強(qiáng)生理活性的天然產(chǎn)物，目前在醫(yī)藥學(xué)上占有重要的地位。我國具有豐富的莨菪烷類生物堿的動植物資源，并且投入應(yīng)用的生物堿種類數(shù)量較大，其中包括天然存在的生物堿與人工合成的衍生物。其在醫(yī)療上應(yīng)用十分廣泛，例如阿托品、東莨菪堿、山莨菪堿和樟柳堿等莨菪烷生物堿藥品，是醫(yī)療機(jī)構(gòu)最常用的藥物之一，有擴(kuò)瞳、解痙、抑制中樞、興奮呼吸、活躍微循環(huán)和解磷毒等諸方面的作用。作為藥物的同時，部分莨菪烷烴類生物堿的毒性較強(qiáng)，過量使用會出現(xiàn)昏迷乃至死亡的現(xiàn)狀，甚至被應(yīng)用于犯罪，中毒癥狀一般會出現(xiàn)幻覺、痙攣等，而目前中毒的鑒定以及評價(jià)技術(shù)還不成熟，對莨菪烷類生物堿對生物的負(fù)面效應(yīng)同樣不是很清晰，所以建立一種合理的藥物毒性評價(jià)體系至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種基于斑馬魚模型對莨菪烷烴類藥物進(jìn)行毒性評價(jià)的方法，該方法能夠利用斑馬魚幼魚和成魚綜合評價(jià)莨菪烷烴類藥物毒性大小。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種基于斑馬魚模型對莨菪類藥物進(jìn)行毒性評價(jià)的方法，包括以下步驟：

(1)配制莨菪類藥物溶液；

(2)采用所述的待測樣對斑馬魚胚胎、斑馬魚幼魚和斑馬魚成魚進(jìn)行處理，并進(jìn)行毒性評價(jià)；

所述毒性反應(yīng)結(jié)果包括斑馬魚幼魚胚胎發(fā)育毒性結(jié)果，斑馬魚幼魚行為學(xué)毒性結(jié)果和斑馬魚成魚行為學(xué)毒性結(jié)果；

(3)根據(jù)所述毒性反應(yīng)結(jié)果得到莨菪類藥物的毒性數(shù)據(jù)。

所述的毒性評價(jià)包括(a)斑馬魚幼魚胚胎發(fā)育毒性評價(jià)；(b)斑馬魚幼魚行為學(xué)毒性評價(jià),采集斑馬魚幼魚的自發(fā)運(yùn)動情況，并進(jìn)行行為學(xué)數(shù)據(jù)處理；(c)斑馬魚成魚行為學(xué)毒性評價(jià),采集斑馬魚成魚的自發(fā)運(yùn)動情況，并進(jìn)行行為學(xué)數(shù)據(jù)處理。

作為優(yōu)選，所述的斑馬魚幼魚為魚齡為6天的斑馬魚，斑馬魚成魚為魚齡為6個月的斑馬魚。

作為優(yōu)選，步驟(1)中，待測莨菪烷烴類藥物包括：(-)莨菪堿、阿托品、東莨菪堿、(-)東莨菪堿氫溴酸鹽、消旋山莨菪堿、氫溴酸樟柳堿、α-托品醇和莨菪亭。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，在顯微鏡下觀察記錄各實(shí)驗(yàn)組斑馬魚心臟、腦部、耳、下頜、眼、肝臟、腸道、軀干/尾/脊索、肌肉/體節(jié)、鰭、體長、身體著色、循環(huán)系統(tǒng)、身體水腫和出血等毒性反應(yīng)情況，統(tǒng)計(jì)各實(shí)驗(yàn)組的毒性發(fā)生率，并對典型毒性器官進(jìn)行拍照。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，采集斑馬魚幼魚的自發(fā)運(yùn)動情況，在全暗環(huán)境下和明暗交替環(huán)境下進(jìn)行。

作為進(jìn)一步的優(yōu)選，步驟(2)中，DanioVision高通量魚類行為跟蹤系統(tǒng)中，采用Ethovision XT10.0軟件追蹤采集40min內(nèi)斑馬魚幼魚的自發(fā)運(yùn)動情況。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，所述的明暗交替環(huán)境下具體為：5min全亮環(huán)境，然后5min全暗環(huán)境，重復(fù)循環(huán)2次。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，所述的自發(fā)運(yùn)動情況包括游動軌跡、游動平均距離、游動最大速度、最大加速度、形態(tài)變化、死亡特征點(diǎn)。

作為優(yōu)選，步驟(2)中，采集斑馬魚成魚的自發(fā)運(yùn)動情況，在全亮環(huán)境下進(jìn)行。