[發(fā)明專利]一種草地貪夜蛾種特異性引物對(duì)及試劑盒和鑒別方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110650724.0
• 申請(qǐng)日: 2021-06-10
• 公開（公告）號(hào): CN113308552B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 岳碧松;王磊;張雪蓮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 成都知棋知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51325
• 代理人: 馬超前

1.一種采用核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的種特異性引物對(duì)及核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的線粒體DNA?COⅠ通用引物對(duì)檢測(cè)草地貪夜蛾的試劑盒，其特征在于，在斜紋夜蛾、甜菜夜蛾、粘蟲和玉米螟中鑒定出草地貪夜蛾；其中，所述種特異性引物對(duì)和線粒體DNA?COⅠ通用引物對(duì)的濃度比為1：2，核苷酸序列如SEQ?IDNO.3和SEQ?ID?NO.4所示的種特異性引物的濃度均為10?μM，用量均為0.4?μL；核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的線粒體DNA?COⅠ通用引物的濃度均為10?μM，用量均為0.8?μL；多重PCR反應(yīng)的退火溫度T_m為56.5~59.5℃。

2.一種基于多重PCR鑒別草地貪夜蛾的方法，其特征在于，該方法采用核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的種特異性引物對(duì)及核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?IDNO.2所示的線粒體DNA?COⅠ通用引物對(duì)進(jìn)行多重PCR反應(yīng)，若擴(kuò)增得到349?bp和COⅠ?目的條帶的擴(kuò)增產(chǎn)物，則待測(cè)昆蟲為草地貪夜蛾；該方法用于在斜紋夜蛾、甜菜夜蛾、粘蟲和玉米螟中鑒定出草地貪夜蛾；

其中，所述種特異性引物對(duì)和線粒體DNA?COⅠ通用引物對(duì)的濃度比為1：2，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的種特異性引物的濃度均為10?μM，用量均為0.4?μL；核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的線粒體DNA?COⅠ通用引物的濃度均為10?μM，用量均為0.8?μL；多重PCR反應(yīng)的退火溫度T_m為56.5~59.5℃。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，該方法的多重PCR反應(yīng)體系的成分包含：Taq?DNA?Polymerase、10×Taq?Buffer、dNTPs、核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的種特異性引物對(duì)、核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的線粒體DNA?COⅠ通用引物對(duì)、待測(cè)昆蟲的DNA基因組、ddH₂O。