[發(fā)明專利]一種用于蠔油灌裝空間的空氣微生物快速檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110650226.6
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113430246B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發(fā)明（設計）人: 張靜;薛忠玉;王洪江;黃攀;桂軍強;張松
• 申請（專利權）人: 佛山市海天（宿遷）調味食品有限公司;海天醋業(yè)集團有限公司;海天蠔油（天津）集團有限公司;佛山市海天調味食品股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24;C12Q1/06;C12Q1/04
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;楊虹坤

本發(fā)明提供了一種用于蠔油灌裝空間的空氣微生物快速檢測方法，包括以下步驟：S1按采樣點布置圖放置培養(yǎng)基，然后根據(jù)現(xiàn)場布置情況，使培養(yǎng)基暴露于空氣中；S2將步驟S1采樣的培養(yǎng)基置于恒溫搖床振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)至剛開始進入穩(wěn)定期；S3移取步驟S2的培養(yǎng)液，離心，去上清液，重置于無菌生理鹽水中混合均勻，移至計數(shù)平板上，涂布均勻，35?37℃培養(yǎng)10?12h。本發(fā)明的檢測方法在采樣階段的培養(yǎng)基中采用了液體培養(yǎng)基，同時添加了蠔油，既可以提供蠔油灌裝空間微生物生長的特性營養(yǎng)源，也可以縮短微生物代謝系統(tǒng)適應培養(yǎng)基環(huán)境的時間，使得空氣中的微生物僅在2?4h的暴露采樣時間內提前適應環(huán)境，開始生長。

技術領域

本發(fā)明屬于空氣微生物檢測技術領域，具體涉及一種用于蠔油灌裝空間的空氣微生物快速檢測方法。

背景技術

GB/T16294規(guī)定了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室和潔凈區(qū)中沉降菌測試條件、測試方法，同樣適用于無菌室或局部空氣凈化區(qū)域的沉降菌的測試和環(huán)境驗證。目前食品行業(yè)大多參考此標準進行空間微生物的檢測。

專利號200410026795.X公開了一種快速定量檢測江河湖水、工業(yè)用水、生活飲用水及海水等水體中細菌總數(shù)、微藻細胞數(shù)量的檢測方法和試劑，提高目前ATP生物發(fā)光法的靈敏度，消除樣品中干擾酶反應的物質對測定體系的影響，但是檢測方法較為復雜，且僅適用于水體檢測。專利號201510937267.8提供了一種痕量微生物快速檢測方法，把熒光標記、溶液過濾、濾膜激光掃描及信號探測和處理結為一體，通過設計自動檢測系統(tǒng)簡化操作步驟，縮短檢測時間，提高檢測精度，但是要求樣品為溶液，涉及檢測設備較多，也不適合空間微生物的檢測。專利號201510366781.0公開了為微生物快速檢測多環(huán)測試紙片、無菌培養(yǎng)基及其制備方法，有效保持培養(yǎng)基水分不流失，同時提供微生物生長所需的氣體成分，簡便快捷。專利號201610936062.2公開了一種微生物快速檢測方法，在特異性液體培養(yǎng)基富集培養(yǎng)樣品中的目標微生物，使用一種由有機硅材料和顏色指示劑溶液組成的傳感器來檢測目標微生物生長時所代謝的小分子產(chǎn)物，縮短檢測時間，檢測結果可靠。專利號201510666900.4公開了一種基于米氏散射和空間光調制器的微生物快速檢測設備，通過計算機對接收到的微生物散射光電信號進行解析計算，實時監(jiān)測當前微生物形態(tài)，實現(xiàn)采集過程中的信號實時采集、處理和分析。專利號201921776148.9公開了一種食品微生物快速檢測裝置，包括微生物快速檢測儀、探頭和消毒盒，方便對微生物檢測儀進行校準，有效清理內側殘渣。

空間微生物的評判常以檢測沉降菌的方式進行，目前沉降菌測試方法培養(yǎng)時間較長，一般采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基(TSA)配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30-35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2天；用沙氏培養(yǎng)基(SDA)配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20-25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5天。

ATP生物發(fā)光技術是目前有望實現(xiàn)即時檢測微生物的最快方法，但是由于靈敏度要求和酶反應的影響，會造成假陽性或假陰性。專利號CN1680805A公開了一種環(huán)境水體微生物快速檢測方法及試劑，先用微孔濾膜去除水中干擾物，然后用細胞ATP釋放劑EC釋放出樣品中的微生物細胞ATP，再進行發(fā)光檢測，大大縮短了檢測時間，但是檢測要求較高，操作復雜，且不適用于空氣微生物的檢測，應用范圍相當局限。

目前微生物檢測方法主要為平板培養(yǎng)計數(shù)法、顯微熒光計數(shù)法、流式細胞術。平板計數(shù)法成本低但檢測速度慢，顯微熒光計數(shù)法觀測時易出現(xiàn)離焦情況、一次性觀測區(qū)域小且手動計數(shù)準確度低，流式細胞術檢測快、可多參數(shù)檢測，但是要求被測濃度高且設備要求較高、檢測成本較高。

雖然目前有很多的微生物檢測方法，但是檢測效率和精度、操作要求或應用范圍相當受限，不能實現(xiàn)空氣微生物的快速、便捷檢測。

發(fā)明內容

為解決國標GB/T?16294規(guī)定的平板培養(yǎng)計數(shù)法培養(yǎng)時間較長，以及常規(guī)快檢法操作復雜且檢測成本較高的問題，本發(fā)明提供一種便捷高效的空氣微生物快速檢測方法，縮短檢測時間，操作簡單，設備要求相對較低，檢測結果可靠，便于應用推廣。

本發(fā)明采用以下技術方案：