[發明專利]一種D-構型抗腫瘤肽及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110649963.4
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113549129A
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 齊昀坤;尹昊;陳西同;馬艷楠;王金艷;杜姍姍;高含;王克威
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/08;A61P35/00;A23L33/18;C12Q1/02
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

本發明提供一種D?構型抗腫瘤肽及其制備方法和應用，屬于多肽制備和生物醫藥技術領域。本發明針對L?型肽易被蛋白酶降解等缺點，合成由D?型氨基酸構成的D?型抗腫瘤肽。D?型多肽對蛋白酶降解有著天然的抗性，這極大地增加了多肽的穩定性。時效曲線實驗表明，D?型多肽的抗腫瘤效果的穩定性是L?型多肽的5倍以上，因此具有良好的實際應用之價值。

技術領域

本發明屬于多肽制備和生物醫藥技術領域，具體涉及一種D-構型抗腫瘤肽及其制備方法和應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

腫瘤是嚴重威脅人類生命和健康的重大疾病，其發病率和死亡率在近幾年呈持續上升的趨勢，我國的癌癥防控形勢依然嚴峻。2015年，中國新發約400萬惡性腫瘤病例，有超過200萬腫瘤癥患者因治療無效而死亡。盡管近年來免疫治療取得了突破性進展，手術、放療和化療仍然是臨床上普遍采用的腫瘤治療方法，尋找安全、合理、有效的腫瘤治療方法是目前腫瘤治療領域亟待解決的問題。

抗菌肽是一類天然產生的重要先天免疫防御物質，抗菌肽功能多樣，其中將具有抗腫瘤活性的抗菌肽叫做抗腫瘤肽(溶瘤肽)。抗腫瘤肽具有很好的研究價值和應用前景，其長度和序列多樣，但大部分抗腫瘤肽都有兩個共同特征：陽離子性和兩親性，其通常由5～40個氨基酸組成，其中精氨酸、賴氨酸和組氨酸的存在使其表現出較強的陽離子特性，表面凈電荷范圍為+2～+9，并且絕大多數的抗腫瘤肽含有α-螺旋或β-折疊結構，這種兩親性側鏈在具有α-螺旋結構的抗腫瘤肽鏈上分別排布在螺旋的兩側，或者集中于兩端，因此可形成親水面和疏水面或者明顯的親水端和疏水端。當抗腫瘤肽與腫瘤細胞膜相互作用時，疏水區域與胞膜脂質結合，帶正電荷的親水區域與帶有負電荷的腫瘤細胞膜表面通過靜電吸附而有效結合，這為抗腫瘤肽能夠選擇性作用于腫瘤細胞和在膜上打孔發揮抗腫瘤作用奠定了基礎。

牛乳鐵蛋白肽(LfcinB)是一種經典的抗菌肽，由25個氨基酸構成，具有兩個兩親性結構，實驗證明其對多種腫瘤具有殺傷作用。根據LfcinB的活性結構設計的新型陽離子抗腫瘤肽LTX-315對普通腫瘤細胞系和耐藥腫瘤細胞系均顯示出明顯的抗腫瘤活性，并且對正常細胞的毒性較低。LTX-315可通過雙重作用誘導細胞死亡，即細胞溶解和誘導免疫反應。實驗證明，細胞溶解后釋放到細胞間質的抗原分子，會激活未成熟的樹突狀細胞，隨后產生特異性抗腫瘤細胞的細胞毒性T淋巴細胞，進而消滅腫瘤細胞。

LTX-315可以有效抑制小鼠移植瘤的生長，并保護小鼠免受第二次同腫瘤的侵襲。此后，LTX-315已經在人類臨床研究的第一階段進行了評估，并被證明其在腫瘤微環境中能引起T細胞增多，免疫抑制細胞減少，并且最終能誘導腫瘤壞死。由于這些特點，LTX-315被認為是一種具有選擇性的強效抗腫瘤藥物。但是，發明人發現，LTX-315由L-型氨基酸構成，半衰期短，容易被蛋白酶降解，需要頻繁給藥，限制了LTX-315的廣泛應用。

發明內容

基于上述現有技術的不足，本發明提供一種D-構型抗腫瘤肽及其制備方法和應用。針對L-型肽易被蛋白酶降解等缺點，本發明合成由D-型氨基酸構成的D-型抗腫瘤肽。D-型多肽對蛋白酶降解有著天然的抗性，這極大地增加了多肽的穩定性。時效曲線實驗表明，D-型多肽的抗腫瘤效果的穩定性是L-型多肽的5倍以上，因此具有良好的實際應用之價值。

本發明的第一個方面，提供一種D-型多肽，所述多肽包含如下氨基酸殘基序列：

WKW-121 H-wrrrrrwrrrrw-NH₂

WKW-215 H-kkwwkkw(dip)k-NHNH₂

WKW-325 H-kkwwkkw(dip)k-NH₂