[發明專利]一種生物膜的制備方法及其產品和應用

有效

• 申請號: 202110647054.7
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113368313B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 董群;任恒飛;胡夏練
• 申請（專利權）人: 吾奇生物醫療科技（江蘇）有限公司
• 主分類號: A61L31/00
• 分類號: A61L31/00;A61L31/14
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提出了一種生物膜的制備方法及其產品和應用。所述生物膜的制備方法包括以下步驟：(1)采用膠原酶抑制劑處理動物腔道組織；(2)去除占動物腔道組織總脂肪含量40％以上的膜層；(3)采用第一酶溶液處理步驟(2)得到的產物；(4)采用堿溶液處理步驟(3)得到的產物；(5)采用脫細胞溶液處理步驟(4)得到的產物；(6)采用脫脂液溶液處理步驟(5)得到的產物；(7)采用第二酶溶液處理步驟(6)得到的產物；(8)采用超臨界二氧化碳清洗步驟(7)得到的產物，得到生物膜。本發明可極大程度地保留了生物膜的多層空間結構、彈性纖維及膠原網狀結構的完整性，機械強度高，能去除產品中有機物和試劑的殘留，使其誘導組織再生效果更好。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種生物膜的制備方法及其產品和應用，尤其涉及一種基于動物腔道組織的多層結構天然生物膜的制備及其在引導組織再生中的應用。

背景技術

組織工程技術的進步和發展為泌尿系統重建、消化系統重建、女性生殖道重建等重要組織器官的修復提供了希望。組織工程技術包含支架材料、種子細胞和生長因子等領域。細胞外基質是較好的支架材料，細胞外基質含有的膠原網狀結構和彈性纖維等利于細胞黏附生長，具有良好的臨床應用前景。近年來，許多研究利用生物酶和試劑除去膀胱、真皮組織中的細胞和細胞碎片，留下細胞外基質，成為無細胞和富含膠原蛋白、彈性蛋白、彈性纖維、血管框架的基質結構。這種材料具有良好的生物相容性和機械穩定性，免疫原性相對較低，從而為細胞再生提供了一個良好的支架，營造了細胞再生所需的優良微環境。

CN107397978A公開了一種動物腔道組織脫細胞基質的制備方法，取動物腔道組織的粘膜下層，經過病毒滅活步驟、脫脂步驟以及脫細胞步驟制得，其中，所述脫細胞步驟包括多次凍融步驟以及所述多次凍融步驟之后的脫細胞溶液脫細胞步驟。該方法存在脫細胞和脫脂處理的方式存在用藥量過大、脫細胞不徹底、用藥毒性大殘留多、制備材料機械性能低的問題。

CN106256382A公開了一種制備膀胱膜生物支架的方法，包括：(1)用NaOH處理膀胱組織；(2)用TritonX-100和SDS以任意順序處理所得物，并重復一遍該步驟；(3)用NaOH處理所得物；(4)將所得物低溫干燥。該方法同樣存在脫細胞和脫脂處理的方式存在用藥量過大、脫細胞不徹底、用藥毒性大殘留多、制備材料機械性能低的問題；而且由于部分保留肌肉層，但是受脂肪影響，制備時間極長(完成流程需45天才能制備得到)。

CN107164298A公開了一種軟組織去細胞基質的制備方法，涉及臨床醫學、生物醫學與再生醫學技術領域，本發明提供的一種軟組織去細胞基質的制備方法，使用超臨界流體技術制備天然軟組織去細胞基質。本發明提供的軟組織去細胞基質的制備方法，對軟組織基質成分的破壞更小，獲得的軟組織去細胞基質的免疫原性低，生物相容性好。

因此，開發一種能最大程度地保留了生物膜的多層空間結構、彈性纖維及膠原網狀結構的完整性的生物酶制備方法是本領域研究的重點。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一種生物膜的制備方法及其產品和應用，特別是提供一種富含多層結構的生物膜的制備方法及其產品和應用。本發明所述制備方法可極大程度地保留了生物膜的多層空間結構、彈性纖維及膠原網狀結構的完整性，機械強度高，并能去除產品中有機物和試劑的殘留，使其誘導組織再生效果更好；且制備富含多層結構的生物膜的整體耗時極短，僅需7天以內。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種生物膜的制備方法，所述生物膜的制備方法包括以下步驟：

(1)采用膠原酶抑制劑處理動物腔道組織；

(2)去除占動物腔道組織總脂肪含量40％以上的膜層；

(3)采用第一酶溶液處理步驟(2)得到的產物；

(4)采用堿溶液處理步驟(3)得到的產物；