[發明專利]一種病理細胞分離吸附式提取方法

在審

• 申請號: 202110646750.6
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113174361A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 陳俊林;朱丹;施慧慧;馬娟
• 申請（專利權）人: 南通市第一老年病醫院（上海大學附屬南通醫院;南通市第六人民醫院;南通市肺科醫院）
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12M1/26;C12M1/38;C12M1/34
• 代理公司: 南京禾祁專利代理事務所(普通合伙) 32462
• 代理人: 黃天天

1.一種病理細胞分離吸附式提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、在手術室無菌環境下收集胸膜炎胸水，存放于無菌的儲運盒中，貼好標簽、條碼，儲運盒的溫度保持在4-10℃，24小時內送達實驗室；

S2、將儲運盒中的胸膜炎胸水與生理鹽水按3：1的比例混勻得混合液；

S3、將吸附式提取裝置拆卸置于紫外線滅菌燈光下，滅菌30min，滅菌完成后，將吸附層(4)安裝在吸附式提取裝置內；

S4、通過外力按壓吸附式提取裝置的殼體(1)，使殼體(1)內部呈負壓狀態，此時沿吸附式提取裝置的入液口(21)添加步驟S2中制備的混合液，通過吸附層(4)進行分離吸附式提取；

S5、拆卸吸附層(4)，根據病理細胞的直徑從相應的吸附層(4)中提取分離的胸膜炎胸水病理細胞；

S6、將提取的病理細胞轉移至培養基純化培養，并進行冷凍儲存。

2.根據權利要求1所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述吸附式提取裝置的頂部通過螺紋結構可拆卸式連接有殼蓋(2)，所述殼體(1)為圓臺型結構，所述吸附層(4)設置在殼蓋(2)與殼體(1)間，所述入液口(21)設置在殼蓋(2)上，所述殼體(1)底部滑動套接有底座(11)，所述底座(11)與殼體(1)間夾接有阻尼彈簧(16)。

3.根據權利要求2所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述殼體(1)內固定有按壓支架(13)，所述按壓支架(13)為圓管型結構，所述按壓支架(13)的頂部插接設有吸管(3)，所述吸管(3)包括膠頭(32)和吸管嘴(31)，所述述吸管(3)上還固定有與按壓支架(13)相匹配的限位環(33)。

4.根據權利要求2所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述殼體(1)底部設有過液槽(14)，所述底座(11)的內底固定有積液槽(12)，所述底座(11)內壁固定有用于將提取液導入積液槽(12)的導液坡口(15)，所述導液坡口(15)的頂部設有與過液槽(14)相匹配的密封墊(151)。

5.根據權利要求2所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述吸附芯(43)包括上連接環(41)、下連接環(42)和吸附芯(43)，所述吸附芯(43)分為孔徑不同的多層吸附結構，多層所述吸附結構呈錐形依次套接排布，所述吸附結構的錐面呈四十五傾斜度設置。

6.根據權利要求5所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述吸附結構的錐形內壁等距均分固定設有若干擋板(44)，所述擋板(44)與吸附結構的錐形內壁垂直設置。

7.根據權利要求5所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述上連接環(41)與下連接環(42)相遠離的一側均設有環形卡扣(46)，所述殼體(1)及殼蓋(2)上均設有與環形卡扣(46)相匹配的卡扣槽。

8.根據權利要求5所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述上連接環(41)與吸附芯(43)間夾接有張緊裝置(45)，所述張緊裝置(45)包括彈簧片(451)和張緊橡膠(452)，所述彈簧片(451)呈剖面V字型的圓環結構，所述張緊橡膠(452)固定在彈簧片(451)的V型開口間，所述彈簧片(451)的頂側與上連接環(41)的底側膠接固定，所述吸附芯(43)的上端和下端分別與彈簧片(451)底端、下連接環(42)頂端膠接固定。

9.根據權利要求5所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述吸附芯(43)的多層吸附結構自內而外依次包括白細胞吸附層、紅細胞吸附層和血小板吸附層，所述白細胞吸附層為尼龍纖維結構，所述白細胞吸附層的吸附孔徑為10-20μm，所述紅細胞吸附層為中性打孔吸附樹膠結構，所述紅細胞吸附層的吸附孔徑為7-8μm，所述血小板吸附層為單壁碳納米管無紡膜結構，所述血小板吸附層的吸附孔徑為2-3μm。

10.根據權利要求2所述的一種吸附式提取裝置，其特征在于：所述殼蓋(2)頂部設有溫度檢測裝置(22)和恒溫裝置(23)，所述溫度檢測裝置(22)的檢測端和恒溫裝置(23)的輸出端均延伸至殼體(1)內。