[發明專利]一種病理細胞分離吸附式提取方法

在審

• 申請號: 202110646750.6
• 申請日: 2021-06-10
• 公開（公告）號: CN113174361A
• 公開（公告）日: 2021-07-27
• 發明（設計）人: 陳俊林;朱丹;施慧慧;馬娟
• 申請（專利權）人: 南通市第一老年病醫院（上海大學附屬南通醫院;南通市第六人民醫院;南通市肺科醫院）
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12M1/26;C12M1/38;C12M1/34
• 代理公司: 南京禾祁專利代理事務所(普通合伙) 32462
• 代理人: 黃天天

本發明提供了一種病理細胞分離吸附式提取方法，屬于細胞提取領域，一種病理細胞分離吸附式提取方法，包括包括以下步驟：S1、收集胸膜炎胸水并儲運；S2、制備混合液；S3、吸附式提取裝置及吸附層安裝準備；S4、添加步驟S2中制備的混合液，通過吸附層進行分離吸附式提取；S5、拆卸吸附層，提取分離的病理細胞；S6、將提取的病理細胞轉移至培養基純化培養，并進行冷凍儲存。本發明通過帶有吸附層的殼體結構設計，最大限度的保持細胞的活性，不破壞其結構，并且該方法也可通過多層吸附的方式分別對白細胞、紅細胞、血小板這些非相關細胞進行分層分離，便于對病理細胞的提純，具有市場前景，適合推廣。

技術領域

本發明涉及細胞提取技術領域，尤其涉及一種病理細胞分離吸附式提取方法。

背景技術

胸膜炎可由于感染(細菌、病毒、霉菌、阿米巴、肺吸蟲等)和感染因素，如腫瘤、變態反應、化學性和創傷性等多種疾病所引起。細菌感染所致的胸膜炎中，結核菌性胸膜炎最常見。引起胸膜炎的常見疾病：肺炎、肺栓塞所致的肺梗死、癌癥、結核病、類風濕性關節炎、系統性紅斑狼瘡、寄生蟲感染(如阿米巴病)、胰腺炎、損傷(如肋骨骨折)、由氣道或其他部位到達胸膜的刺激物(如石棉)、藥物過敏反應(如肼苯噠嗪、普魯卡因酰胺、異煙肼、苯妥英、氯丙嗪)等。

病理檢查已經大量應用于臨床工作及科學研究。在臨床方面主要進行尸體病理檢查及手術病理檢查。手術病理檢查的目的，一是為了明確診斷及驗證術前的診斷，提高臨床的診斷水平；二是診斷明確后，可決定下步治療方案及估計預后，進而提高臨床的治療水平，通過臨床病理分析，也可獲得大量極有價值的科研資料。

常規的胸膜炎胸水的病理細胞提取需要經過離心、沉淀、固定、切片這些操作，而在分離病理細胞的時候往往通過的是高速離心的方式，但這種方式難免會對一些細胞的活性產生一定程度的破壞。為此我們提出一種病理細胞分離吸附式提取方法來解決以上問題。

發明內容

為克服現有技術中存在的問題，本發明提供了一種病理細胞分離吸附式提取方法，可以通過帶有吸附層的殼體結構設計，通過分離吸附的方式，在常壓、低溫狀態下對相關病理提取液進行吸附式分離，最大限度的保持細胞的活性，不破壞其結構，并且該方法也可通過多層吸附的方式分別對白細胞、紅細胞、血小板這些非相關細胞進行分層分離，便于對病理細胞的提純，具有市場前景，適合推廣。

為解決上述問題，本發明采用如下的技術方案。

一種病理細胞分離吸附式提取方法，包括以下步驟：

S1、在手術室無菌環境下收集胸膜炎胸水，存放于無菌的儲運盒中，貼好標簽、條碼，儲運盒的溫度保持在4-10℃，24小時內送達實驗室；

S2、將儲運盒中的胸膜炎胸水與生理鹽水按3：1的比例混勻得混合液；

S3、將吸附式提取裝置拆卸置于紫外線滅菌燈光下，滅菌30min，滅菌完成后，將吸附層安裝在吸附式提取裝置內；

S4、通過外力按壓吸附式提取裝置的殼體，使殼體內部呈負壓狀態，此時沿吸附式提取裝置的入液口添加步驟S2中制備的混合液，通過吸附層進行分離吸附式提取；

S5、拆卸吸附層，根據病理細胞的直徑從相應的吸附層中提取分離的胸膜炎病理細胞；

S6、將提取的病理細胞轉移至培養基純化培養，并進行冷凍儲存。

本發明通過帶有吸附層的殼體結構設計，通過分離吸附的方式，在常壓、低溫狀態下對相關病理提取液進行吸附式分離，最大限度的保持細胞的活性，不破壞其結構，并且該方法也可通過多層吸附的方式分別對白細胞、紅細胞、血小板這些非相關細胞進行分層分離，便于對病理細胞的提純，具有市場前景，適合推廣。