[發明專利]5-Fu損傷模型及其構建方法、參芪制劑的質量評控方法

在審

• 申請號: 202110644407.8
• 申請日: 2021-06-09
• 公開（公告）號: CN115449509A
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 吳婉瑩;張子佳;雷敏;鄧燕萍;侯晉軍;龍華麗;劉亮鋒
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海藥物研究所;麗珠集團利民制藥廠
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786;C12Q1/02
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 劉陽

1.一種RAW264.7細胞的5-Fu損傷模型的構建方法，包括以下步驟：

配制RAW264.7細胞懸浮液和5-Fu工作液：

將RAW264.7細胞懸浮液接種至培養容器中，培養；

加入5-Fu工作液，繼續培養，制得5-Fu損傷模型。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述培養容器是細胞孔板，所述5-Fu損傷模型的鋪板密度為10000個/孔；和/或

所述5-Fu損傷模型的5-Fu造模濃度為2μM；和/或

所述5-Fu損傷模型的造模時間為16h。

3.權利要求1或2所述構建方法所得到的RAW264.7細胞的5-Fu損傷模型。

4.權利要求3所述的RAW264.7細胞的5-Fu損傷模型在參芪制劑的質量評控中的應用。

5.一種參芪制劑的質量評控方法，其特征在于，包括以下步驟:

用參芪制劑配制成參芪溶液；

配制5-Fu工作液；

獲取RAW264.7細胞懸浮液；

將所述RAW264.7細胞懸浮液接種至培養容器中，培養，將所述培養容器分為參芪處理組、5-Fu模型組和對照組；

向所述參芪處理組中添加所述參芪溶液，向所述5-Fu模型組中添加等量的生理鹽水，向所述對照組添加等量的生理鹽水，培養；

向所述參芪處理組添加所述5-Fu工作液，向所述5-Fu模型組添加等量的5-Fu工作液，向所述對照組添加等量的細胞培養基，培養；

細胞培養結束后，以所述對照組為基準，計算所述參芪處理組和所述5-Fu模型組的細胞存活率。

6.根據權利要求5所述的質量評控方法，其特征在于，將所述RAW264.7細胞懸浮液接種至培養容器中的步驟中，所述培養容器是細胞孔板，鋪板密度為10000個/孔；和/或

向所述參芪處理組中添加所述參芪溶液，向所述5-Fu模型組中添加等量的生理鹽水，向所述對照組添加等量的生理鹽水，培養的步驟中，培養時間為7-9h；和/或

向所述參芪處理組添加所述5-Fu工作液，向所述5-Fu模型組添加等量的5-Fu工作液，向所述對照組添加等量的細胞培養基，培養的步驟中，培養時間為4-16h；和/或

所述參芪處理組和所述5-Fu模型組中的所述5-Fu工作液的最終濃度為2μM。

7.根據權利要求5所述的質量評控方法，其特征在于，采用以下方法獲取所述RAW264.7細胞懸浮液：

將保藏的RAW264.7細胞復蘇；

將復蘇的RAW264.7細胞置于細胞培養基中進行培養；

將細胞吹打，離心，棄去上清液，轉移至新鮮細胞培養基中，培養；

細胞80-90％融合時，棄去原細胞培養基，加入新鮮細胞培養基，刮下細胞、吹打均勻后，按1:4～1:6傳代，繼續培養；

將細胞濃度調整為所需濃度，獲得所述RAW264.7細胞懸浮液。

8.根據權利要求5所述的質量評控方法，其特征在于，細胞培養結束后，吸出各組的細胞培養基，并加入CCK-8的無血清細胞培養基，在培養箱中反應40～60min，然后于450nm處，使所述對照組的吸光度值在0.7～0.9范圍內，測定各組的吸光度值，根據以下公式計算所述參芪處理組的細胞活力；

細胞活力(％)＝(A₁–A₀)/(A₂–A₀)×100％

其中，A₁為所述參芪處理組的吸光度值，A₂為所述Fu模型組的吸光度值，A₀為僅含有CCK-8溶液的空白對照組的吸光度值。