[發明專利]5-Fu損傷模型及其構建方法、參芪制劑的質量評控方法在審

申請號：	202110644407.8	申請日：	2021-06-09
公開（公告）號：	CN115449509A	公開（公告）日：	2022-12-09
發明（設計）人：	吳婉瑩;張子佳;雷敏;鄧燕萍;侯晉軍;龍華麗;劉亮鋒	申請（專利權）人：	中國科學院上海藥物研究所;麗珠集團利民制藥廠
主分類號：	C12N5/0786	分類號：	C12N5/0786;C12Q1/02
代理公司：	華進聯合專利商標代理有限公司 44224	代理人：	劉陽
地址：	200135 上海***	國省代碼：	上海;31
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摘要：
搜索關鍵詞：	fu 損傷模型及其構建方法制劑質量
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【說明書】：

本發明涉及5?Fu損傷模型的構建方法及其應用、參芪制劑的質量評控方法。本發明建立了單核巨噬細胞RAW264.7細胞的5?Fu損傷模型，模擬化療藥物對白細胞的細胞毒性作用，通過測定參芪制劑對模型中RAW264.7細胞的保護作用，來評價參芪制劑的生物活性，建立一種結合臨床功效和體外細胞模型的生物質量評控方法。

技術領域

本發明涉及藥物質量評控技術領域，特別涉及5-Fu損傷模型及其構建方法、參芪制劑的質量評控方法。

背景技術

參芪制劑是由黨參和黃芪兩味中藥，經水提加工而成的純中藥制劑，例如：參芪扶正注射液，主要作用是益氣、扶正，用于肺脾氣虛所引起的癥狀，例如神疲、乏力、少氣、懶言、自汗、眩暈，臨床多用于肺癌、胃癌等伴有上述癥狀患者的輔助治療。臨床效果表明參芪制劑能有效地提高由于化療導致的白細胞減少，提高患者的免疫力，改善其精神狀態，加速患者化療后的恢復。

但是黨參和黃芪來源復雜，生產工藝步驟較多，導致參芪制劑的化學成分多樣，藥效物質基礎復雜，給其質量控制和評價增加了相當大的難度。而現有的化學定性鑒別、指紋圖譜及指標性成分檢測，仍難以揭示其全部有效成分或特征成分，也難以表征其理化成分與生物活性之間的相關性。因此，根據參芪制劑的具體情況，結合現代科學技術手段，探索既能夠符合中醫藥特點的，又能在一定程度上關聯臨床療效評價方法，建立具有可操作性的生物質量評控方法，保證其臨床療效的一致性和穩定性，具有重要的意義。

發明內容

基于此，本發明提供了一種用于參芪制劑的質量評控的5-Fu損傷模型及其構建方法，同時還提供了一種參芪制劑的質量評控方法。使用該-Fu損傷模型的參芪制劑的質量評控方法具有較高的穩定性和重現性。

本發明第一方面提供了一種RAW264.7細胞的5-Fu(5-氟尿嘧啶)損傷模型的構建方法，包括以下步驟：

S110：配制RAW264.7細胞懸浮液和5-Fu工作液：

S120：將RAW264.7細胞懸浮液接種至培養容器中，培養；

S130：加入5-Fu工作液，繼續培養，制得5-Fu損傷模型。

在其中一些實施例中，步驟S110中的配制RAW264.7包括以下步驟：

S111：RAW264.7細胞復蘇；

S112：將復蘇的RAW264.7細胞置于細胞培養基中進行培養；

S113：將細胞吹打，離心，棄去上清液，轉移至新鮮細胞培養基中，培養；

S114：細胞80％-90％融合時，棄去原細胞培養基，加入新鮮細胞培養基，刮下細胞、吹打均勻后，按1:4～1:6傳代，繼續培養；

S115：將細胞濃度調整為所需濃度，獲得所述RAW264.7細胞懸浮液。