[發明專利]融合基因突變的熒光定量PCR檢測方法在審
| 申請號： | 202110642037.4 | 申請日： | 2021-06-09 |
| 公開（公告）號： | CN113136419A | 公開（公告）日： | 2021-07-20 |
| 發明（設計）人： | 謝洪濤;羅偉全;王勇斯;溫韻潔;陳丹;余沁涵 | 申請（專利權）人： | 廣州華銀健康醫療集團股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6858 | 分類號： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 廣州瑞之凡知識產權代理事務所(普通合伙) 44514 | 代理人： | 黃愛君 |
| 地址： | 510663 廣東省廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 融合 基因突變 熒光 定量 pcr 檢測 方法 | ||
1.融合基因突變的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：
1)融合基因位點查找：查找融合基因信息，查找其外顯子斷裂點，并根據外顯子斷裂點查找其斷裂點到終止點的轉錄本序列；
2)融合突變序列兼并分析：將步驟1)得到的兩段轉錄本序列合并，作為完整的融合結果序列；
3)擴增引物的設計與合成：以步驟2)得到的融合結果序列為序列模板，進行上下游擴增引物的序列設計，合成并純化；
4)反應體系的擴增與驗證：包括如下步驟：4.1準備陰性和陽性RNA樣本，將陽性RNA樣本按照倍數比例稀釋為低突變頻率陽性RNA樣本，稀釋過程使用陰性樣本作為稀釋劑；4.2RNA樣本逆轉錄，使用試劑盒進行RNA逆轉錄成cDNA；4.3反應體系配制和PCR擴增：配制含所述上下游擴增引物的反應體系，進行PCR擴增，每個循環結束后收集熒光信號；4.4結果判斷：根據擴增溶解曲線讀取Tm值，進行檢測結果的判斷。
2.根據權利要求1所述的融合基因突變的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于：所述融合基因為EML4-ALK，其外顯子斷裂點包括EML4基因20號外顯子斷裂點和ALK基因20號外顯子斷裂點。
3.根據權利要求2所述的融合基因突變的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于：所述上下游擴增引物包括：上游引物TGGTCCCCAGACAACAAGTAT，即SEQ ID NO：1，下游引物TTGGGGTTGTAGTCGGTCAT，即SEQ ID NO：2。
4.根據權利要求2所述的融合基因突變的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于：所述反應體系包括所述上下游擴增引物、擴增反應液、cDNA和無核酸酶水；PCR擴增的運行條件包括：95℃30s；95℃10s，60℃30s，40個循環。
5.根據權利要求1或2所述的融合基因突變的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于：所述試劑盒為cDNA一鏈合成試劑盒。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于廣州華銀健康醫療集團股份有限公司，未經廣州華銀健康醫療集團股份有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202110642037.4/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇：一種高強度長壽命粘結的固體潤滑涂層及其制備方法和應用
- 下一篇：一種電動夾具
