[發明專利]一株產熱穩定和pH穩定細菌素的乳酸乳球菌及其篩選方法和應用

在審

• 申請號: 202110641135.6
• 申請日: 2021-06-09
• 公開（公告）號: CN113403228A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 熊濤;彭珍;許曉燕
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P21/00;C07K14/195;C12R1/01
• 代理公司: 南昌金軒知識產權代理有限公司 36129
• 代理人: 余鵬錦

1.一株產熱穩定和pH穩定細菌素的乳酸乳球菌，其特征在于，所述乳酸乳球菌篩選自自然發酵的泡菜，命名為NCU036018。

2.根據權利要求1所述的產熱穩定和pH穩定細菌素的乳酸乳球菌，其特征在于，所述乳酸乳球菌的16S rRNA序列如SEQ ID：1所示。

3.根據權利要求1所述的產熱穩定和pH穩定細菌素的乳酸乳球菌，其特征在于，所述乳酸乳球菌株于2021年3月26日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.22077。

4.根據權利要求1-3任一項所述的一株產熱穩定和pH穩定細菌素的乳酸乳球菌的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)培養：取泡菜樣品液1mL用生理鹽水進行梯度稀釋，選取合適濃度梯度，涂布于MRS固體培養基上，37℃倒置培養46-50h；

(2)純化：挑取步驟(2)培養基上具有不同形態的單菌落進行連續劃線純化培養；

(3)保存：挑取步驟(3)純化好的單菌落于10mL MRS液體培養基中孵育22-25h，分別取培養液和50％的滅菌甘油各500μL按1:1(v/v)混合并保存于-80℃冰箱；

(4)活化：將步驟(3)分離保存的菌株接種到MRS液體培養基中，37℃活化22-25h，再以2％的接種量接種到MRS液體培養基中，37℃恒溫培養22-25h得到乳酸菌發酵液；

(5)分離：將步驟(4)中發酵液離心收集上清液，調節上清液pH為6.5并用0.22μm微孔濾膜過濾，濾液采用高壓滅菌鍋121℃加熱30min，置于4℃備用；

(6)篩選：將培養24h后的指示菌加入至LB培養基中，混勻后倒平板，待冷卻凝固后打8mm的孔，每皿三個孔，向每個孔中加入200μL步驟(5)制備好的濾液，37℃下培養14-16h，測定抑菌圈直徑，根據抑菌圈直徑大小篩選抑菌性能優異的菌株。

5.根據權利要求4所述的一株產熱穩定和pH穩定細菌素的乳酸乳球菌的篩選方法，其特征在于，所述步驟(1)中泡菜樣品采自市場上不同種類自然發酵的泡菜，濃度梯度設置為10^-3，10^-4，10^-5。

6.根據權利要求4所述的一株產熱穩定和pH穩定細菌素的乳酸乳球菌的篩選方法，其特征在于，所述步驟(5)中離心轉速為6500-7000g，分離時間為10-12min。

7.根據權利要求4所述的一株產熱穩定和pH穩定細菌素的乳酸乳球菌的篩選方法，其特征在于，所述步驟(6)中指示菌為金黃色葡萄球菌和鼠傷寒沙門氏菌，其加入到LB培養基中后的濃度為1.0×10⁷CFU/mL。

8.一種根據權利要求1-3任一項所述的乳酸乳球菌生產的細菌素，其特征在于，所述細菌素能在pH 2-10范圍內同時抑制鼠傷寒沙門氏菌和金黃色葡萄球菌。

9.根據權利要求8所述的細菌素，其特征在于，所述細菌素的生產時間為15-16h。

10.一種根據權利要求8或9所述的細菌素在食品發酵和保藏過程中的應用。