[發明專利]一種塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒及其檢測方法和應用在審
| 申請號： | 202110639950.9 | 申請日： | 2021-06-09 |
| 公開（公告）號： | CN113549685A | 公開（公告）日： | 2021-10-26 |
| 發明（設計）人： | 陳立波;劉丹 | 申請（專利權）人： | 湖南菲思特精準醫療科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6883 | 分類號： | C12Q1/6883;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 湖南喬熹知識產權代理事務所(普通合伙) 43262 | 代理人： | 安曼 |
| 地址： | 410000 湖南省長沙市開福區沙坪街道中*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 塞來昔布 代謝 標志 檢測 試劑盒 及其 方法 應用 | ||
1.一種塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒檢測塞來昔布代謝標志物基因位點CYP2C9*3的基因多態性，所述試劑盒包括CYP2C9*3擴增引物、CYP2C9*3測序引物和陽性對照。
2.根據權利要求1所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述CYP2C9*3擴增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。
3.根據權利要求1所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述CYP2C9*3測序引物如序列表SEQ ID NO:3所示。
4.根據權利要求1所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述測序引物為瓊脂糖凝膠顆粒與氨基標記的DNA序列的結合物。
5.根據權利要求1所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括擴增緩沖液、18mM醋酸鎂、dNTPS、鏈置換DNA聚合酶、單鏈DNA結合蛋白、結合單鏈核酸的重組酶和海藻糖。
6.根據權利要求5所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中各組分終濃度為：擴增前后引物各0.32uM，dNTPS 0.3mM，鏈置換DNA聚合酶1.2ng/μL，單鏈DNA結合蛋白3.2ng/μL，結合單鏈核酸的重組酶4.8ng/μL，海藻糖0.2％。
7.根據權利要求1所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，CYP2C9*3測序引物對應的測序區域為CYP2C9*3待檢序列，如序列表SEQ ID NO:4所示。
8.根據權利要求1所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，CYP2C9*3待檢序列對應CYP2C9*3分配指令如序列表SEQ ID NO:5所示。
9.一種采用權利要求1～8任一項所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：
a.將所述擴增反應液與5ul待測基因組DNA，采用RPA擴增進行擴增；
b.將10ul反應產物與3ul測序引物分別進行結合；
c.向每個測序管中加入測序酶和測序底物；
d.取一個dNTP排管，自圓滑一端向平端依次加入dATPαS、dTTP、dGTP、dCTP；
e.焦磷酸測序；
f.確定CYP2C9*3位點塞來昔布位點的基因型。
10.一種根據權利要求1～8任一項所述的塞來昔布代謝標志物的檢測試劑盒的應用，其特征在于，所述檢測試劑盒用于體外檢測待測樣本中的CYP2C9*3基因多態性。
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