[發明專利]一種硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒及其檢測方法和應用

在審

• 申請號: 202110639835.1
• 申請日: 2021-06-09
• 公開（公告）號: CN113584143A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 陳立波;劉丹
• 申請（專利權）人: 湖南菲思特精準醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6844;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 湖南喬熹知識產權代理事務所(普通合伙) 43262
• 代理人: 安曼

1.一種硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒用于檢測硝酸甘油的代謝標志物基因位點ALDH2 G1510A的基因多態性，試劑盒包括ALDH2G1510A擴增引物、ALDH2 G1510A測序引物和陽性對照。

2.根據權利要求1所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述ALDH2G1510A擴增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示。

3.根據權利要求1所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述ALDH2G1510A測序引物如序列表SEQ ID NO:3所示。

4.根據權利要求1所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述測序引物為瓊脂糖凝膠顆粒與氨基標記的DNA序列的結合物。

5.根據權利要求1所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括擴增緩沖液、18mM醋酸鎂、dNTPS、鏈置換DNA聚合酶、單鏈DNA結合蛋白、結合單鏈核酸的重組酶和海藻糖。

6.根據權利要求5所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中各組分終濃度為：擴增前后引物各0.32uM，dNTPS 0.3mM，鏈置換DNA聚合酶1.2ng/μL，單鏈DNA結合蛋白3.2ng/μL，結合單鏈核酸的重組酶4.8ng/μL，海藻糖0.2％。

7.根據權利要求1所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，ALDH2G1510A測序引物對應的測序區域為ALDH2 G1510A待檢序列，如序列表SEQ ID NO:4所示。

8.根據權利要求1所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒，其特征在于，ALDH2G1510A待檢序列對應ALDH2 G1510A分配指令如序列表SEQ ID NO:5所示。

9.一種采用權利要求1～8任一項所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括以下步驟：

a.將所述擴增反應液與5ul待測基因組DNA，采用RPA擴增進行擴增；

b.將10ul反應產物與3ul測序引物分別進行結合；

c.向每個測序管中加入測序酶和測序底物；

d.取一個dNTP排管，自圓滑一端向平端依次加入dATPαS、dTTP、dGTP、dCTP；

e.焦磷酸測序；

f.確定ALDH2 G1510A位點硝酸甘油位點的基因型。

10.一種采用權利要求1～8任一項所述的硝酸甘油代謝標志物的檢測試劑盒的應用，其特征在于，所述檢測試劑盒用于體外檢測待測樣本中的ALDH2 G1510A基因多態性。