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[發(fā)明專利]一種含nCas3單鏈核酸內(nèi)切酶的工程菌、制備方法及應(yīng)用有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 202110639403.0 申請日: 2021-06-08
公開(公告)號: CN113528409B 公開(公告)日: 2022-03-01
發(fā)明(設(shè)計)人: 彭文舫;郝怡樂 申請(專利權(quán))人: 湖北大學(xué)
主分類號: C12N1/21 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12N15/55;C12R1/01
代理公司: 北京金智普華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401 代理人: 藍(lán)曉玉
地址: 430062 湖北省武漢市武*** 國省代碼: 湖北;42
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 ncas3 核酸 內(nèi)切酶 工程 制備 方法 應(yīng)用
【權(quán)利要求書】:

1.一種含nCas3單鏈核酸內(nèi)切酶的工程菌的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

S1:將質(zhì)粒pL2R用Bsa I核酸內(nèi)切酶酶切后,與原間隔序列S(D608)連接,將連接產(chǎn)物用EcoR I和Xba I核酸內(nèi)切酶酶切后,與核苷酸替換后的cas3基因序列連接組裝,得到單堿基編輯質(zhì)粒;所述原間隔序列S(D608)的序列如SEQ ID NO.16所示;所述核苷酸替換后的cas3基因序列如SEQ ID NO.17所示;

S2:將單堿基編輯質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到制備成感受態(tài)細(xì)胞的DRM1菌株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含nCas3單鏈核酸內(nèi)切酶的工程菌的制備方法,其特征在于:所述原間隔序列S(D608)由引物退火過程得到,將SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示的引物各1μL混合到反應(yīng)緩沖液中,經(jīng)PCR儀95℃反應(yīng)5分鐘后再降至室溫反應(yīng)10分鐘得到。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含nCas3單鏈核酸內(nèi)切酶的工程菌的制備方法,其特征在于:所述核苷酸替換后的cas3基因序列由ZM4基因組在SEQ ID NO.8-SEQ ID NO.11所示的引物克隆得到。

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1、專利原文基于中國國家知識產(chǎn)權(quán)局專利說明書;

2、支持發(fā)明專利 、實(shí)用新型專利、外觀設(shè)計專利(升級中);

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