[發明專利]一種糞腸球菌保存方法及冷凍保存用保存劑

在審

• 申請號: 202110638687.1
• 申請日: 2021-06-08
• 公開（公告）號: CN113388522A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 張志榕;王小芬;鄭甜力;肖俊峰;陳志敏;吳賢峰;吳有林
• 申請（專利權）人: 福建傲農生物科技集團股份有限公司;亞太星原農牧科技海安有限公司;南昌傲農生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/20;C12N1/36;C12R1/01
• 代理公司: 上?？剖⒅R產權代理有限公司 31225
• 代理人: 蔣亮珠

1.一種糞腸球菌冷凍保存方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)菌液制備：將糞腸球菌接種到含有培養基的容器中，靜置培養；

(2)第一次傳代：從培養后的容器中吸取菌液，并與保護劑混勻，進行冷凍，然后解凍，再吸取菌液，接種到另一個含有培養基的容器中，靜置培養；

(3)第二次傳代：從培養后的容器中吸取菌液，并與保護劑混勻，進行冷凍，然后解凍，再吸取菌液，接種到另一個含有培養基的容器中，靜置培養；

(4)第三次傳代：從培養后的容器中吸取菌液，并與保護劑混勻，進行冷凍，然后解凍，再吸取菌液，接種到另一個含有培養基的容器中，靜置培養；

(5)分裝保存：將培養后的菌液離心，并去掉上清液后，向菌泥加入保存劑，混合均勻，放置一段時間后，低溫保存。

2.根據權利要求1所述的一種糞腸球菌冷凍保存方法，其特征在于，所述靜置培養的溫度為37-38℃，時間為24-36h。

3.根據權利要求1所述的一種糞腸球菌冷凍保存方法，其特征在于，所述的培養基包含以下濃度份組分：蛋白胨8-10g/L，酵母浸粉4-5g/L，葡萄糖8-10g/L，乙酸鈉4-5g/L，檸檬酸二銨1.6-2g/L，磷酸氫二鉀1.6-2g/L。

4.根據權利要求1所述的一種糞腸球菌冷凍保存方法，其特征在于，傳代時，從培養后的容器中吸取菌液與保護劑的體積相等。

5.根據權利要求1所述的一種糞腸球菌冷凍保存方法，其特征在于，所述的保護劑是質量濃度為18-20％的甘油溶液。

6.根據權利要求1所述的一種糞腸球菌冷凍保存方法，其特征在于，所述冷凍的溫度為-80℃，步驟(2)中冷凍的時間為10-20min，步驟(3)中冷凍的時間為30-40min，步驟(4)中冷凍的時間為50-60min。

7.根據權利要求1所述的一種糞腸球菌冷凍保存方法，其特征在于，所述保存劑的體積為菌泥的4-5倍。

8.根據權利要求1所述的一種糞腸球菌冷凍保存方法，其特征在于，所述離心轉速為4000-5000r/min。時間為10-15min；所述放置的時間為20-30min，低溫保存的溫度為-80℃。

9.一種糞腸球菌冷凍保存用保存劑，其特征在于，該保存劑包含以下質量百分比組分：甘油18-20％，氯化物4-5％，磷酸氫二鹽0.5-0.56％，磷酸二氫鹽0.04-0.1％，余量水，pH為8.5-9.0。

10.根據權利要求9所述的糞腸球菌冷凍保存用保存劑，其特征在于，所述的氯化物包括氯化鈉或氯化鉀；所述的磷酸氫二鹽包括磷酸氫二鉀或磷酸氫二鈉；所述的磷酸二氫鹽包括磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉。