[發明專利]一種nCas3單鏈核酸內切酶及其應用有效
| 申請號： | 202110638175.5 | 申請日： | 2021-06-08 |
| 公開（公告）號： | CN113528484B | 公開（公告）日： | 2022-02-25 |
| 發明（設計）人： | 彭文舫;郝怡樂 | 申請（專利權）人： | 湖北大學 |
| 主分類號： | C12N9/22 | 分類號： | C12N9/22;C12N15/55;C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401 | 代理人： | 藍曉玉 |
| 地址： | 430062 湖北省武漢市武*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 ncas3 核酸 內切酶 及其 應用 | ||
1.一種nCas3單鏈核酸內切酶，其特征在于：所述nCas3單鏈核酸內切酶為在野生型Cas3蛋白的解旋酶功能域上引發突變，使野生型Cas3蛋白喪失解旋酶活性，只具備單鏈核酸酶活性的nCas3蛋白；
所述野生型Cas3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
所述nCas3單鏈核酸內切酶為K458A、或D608A、或R887A；
所述K458A的氨基酸序列與SEQ ID NO.1相比，區別僅在于將第458位的“K”替換為“A”；
所述D608A的氨基酸序列與SEQ ID NO.1相比，區別僅在于將第608位的“D”替換為“A”；
所述R887A的氨基酸序列與SEQ ID NO.1相比，區別僅在于將第887位的“R”替換為“A”。
2.根據權利要求1所述的一種nCas3單鏈核酸內切酶，其特征在于：所述野生型Cas3蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述K458A的核苷酸序列與SEQ ID NO.2相比，區別僅在于將第1372-1373位的“aa”替換為“gc”；
所述D608A的核苷酸序列與SEQ ID NO.2相比，區別僅在于將第1823位的“a”替換為“c”；
所述R887A的核苷酸序列與SEQ ID NO.2相比，區別僅在于將第2659-2660位的“cg”替換為“gc”。
3.一種轉化體，其特征在于：包含如權利要求2中所述的nCas3單鏈核酸內切酶的核苷酸序列。
4.根據權利要求3所述的一種轉化體，其特征在于：所述轉化體包括重組載體、表達盒、轉基因細胞、重組菌中的任一種。
5.根據權利要求4所述的一種轉化體，其特征在于：所述重組載體包含至少一個啟動子。
6.如權利要求1所述的一種nCas3單鏈核酸內切酶在切割DNA單鏈中的應用。
7.如權利要求1所述的一種nCas3單鏈核酸內切酶在基因編輯中的應用。
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