[發(fā)明專利]一種鑒別棘頭梅童魚南北群體通用的遺傳性別分子標(biāo)記、引物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110636077.8
• 申請日: 2021-06-08
• 公開（公告）號: CN113215280B
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蔡明夷;陳俊男;周莉
• 申請（專利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218
• 代理人: 秦華

本發(fā)明公開了一種鑒別棘頭梅童魚南北群體通用的遺傳性別分子標(biāo)記、引物及其應(yīng)用。所述分子標(biāo)記的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，具有缺失SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的個體，為遺傳雄性棘頭梅童魚。該遺傳性別分子標(biāo)記具有對南部群體和北部群體通用，對魚體傷害小，適用整個生活史，適用材料范圍更廣等優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及水產(chǎn)生物技術(shù)領(lǐng)域中的魚類遺傳性別鑒定和性別控制技術(shù)，尤其涉及一種鑒別棘頭梅童魚南北群體通用的遺傳性別分子標(biāo)記、引物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

染色體水平的研究具有宏觀與直觀的優(yōu)勢，與各種組學(xué)和分子生物學(xué)研究鏈接并互補(bǔ)，是遺傳研究的重要內(nèi)容。性染色體的識別、結(jié)構(gòu)特征與進(jìn)化研究是遺傳學(xué)和進(jìn)化生物學(xué)的研究熱點之一。魚類作為低等脊椎動物，具有豐富多樣的性別決定模式，是研究脊椎動物性染色體結(jié)構(gòu)與進(jìn)化的理想模式系統(tǒng)。了解其性別決定機(jī)制可以改進(jìn)性別控制和生殖控制技術(shù)。另外，魚類的性別還與其繁殖及許多重要經(jīng)濟(jì)性狀緊密相關(guān)，因此性別控制在水產(chǎn)養(yǎng)殖中受到了廣泛關(guān)注。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，目前已有多種類型的DNA分子標(biāo)記被開發(fā)出來，其中主要包括(1)限制性片段長度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)；(2)隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(randomly amplified polymorphic DNA，RAPD)；(3)擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP)；(4)微衛(wèi)星標(biāo)記(microsatellite)；(5)單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism，SNP)。利用上述分子標(biāo)記技術(shù)，已經(jīng)有許多物種的性別特異的分子標(biāo)記被開發(fā)出來，但不同物種其基因組序列結(jié)構(gòu)不同，一個物種的性別特異分子標(biāo)記通常不能用于其他物種的遺傳性別進(jìn)行鑒定。特定物種的性別特異分子標(biāo)記通常需要專門開發(fā)。

棘頭梅童魚(Collichthys lucidus)屬鱸形目，石首魚科，梅童魚屬，主要分布于西太平洋區(qū)，包括中國、朝鮮半島西海岸、日本、菲律賓沿岸等，是亞洲沿海地區(qū)廣泛食用的一種重要的海洋魚類。棘頭梅童魚體型大小存在雌雄二態(tài)，雌性個體大于雄性個體，性別控制相關(guān)技術(shù)具有商業(yè)應(yīng)用潛力。性別分子標(biāo)記是開發(fā)性別控制技術(shù)的重要工具。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種鑒別棘頭梅童魚南北群體通用的性別分子標(biāo)記，以及用于鑒定或輔助鑒定南部群體和北部群體的棘頭梅童魚的性別的引物。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種鑒別棘頭梅童魚南北群體通用的遺傳性別分子標(biāo)記，其特征在于，所述分子標(biāo)記的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，具有缺失SEQ ID NO:1所示核苷酸序列的個體，為遺傳雄性棘頭梅童魚。

本發(fā)明還提供一種用于檢測所述遺傳性別分子標(biāo)記的引物，其特征在于，所述分子標(biāo)記的核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。

本發(fā)明還提供一種用于檢測所述分子標(biāo)記的試劑盒，其特征在于，包括所述引物。

本發(fā)明還提供一種鑒定棘頭梅童魚南北群體性別的分子標(biāo)記的方法，其特征在于，使用所述的引物或試劑盒中的引物，對待測的南北群體棘頭梅童魚進(jìn)行所述分子標(biāo)記的檢測，以確定所述待測南北群體棘頭梅童魚的遺傳性別。

進(jìn)一步，方法為，

獲取待檢測棘頭梅童魚的DNA；

使用所述的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

電泳檢測并判斷。

進(jìn)一步，所述PCR擴(kuò)增的體系為：當(dāng)反應(yīng)總體積為20μL時，具體反應(yīng)體系為ddH₂O13.4μL；10×Buffer 2μL；2.5mM的dNTP 1.6μL；10mM的上游引物0.4μL；10mM的下游引物0.4μL；Taq酶0.2μL；30ng/μL的DNA模板2μL。