[發明專利]一種CAR-CXCL12 T淋巴細胞及其制備方法

在審

• 申請號: 202110633426.0
• 申請日: 2021-06-07
• 公開（公告）號: CN113322236A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 李強
• 申請（專利權）人: 李強
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 新余市渝星知識產權代理事務所(普通合伙) 36124
• 代理人: 廖平

本發明提出了一種CAR?CXCL12T淋巴細胞及其制備方法，屬于基因工程技術領域，所述T細胞的表達靶向CXCR4的嵌合抗原受體為CAR?CXCL12，其基因序列見SEQ ID NO.1。本發明通過基因芯片篩選靶點CXCR4，針對靶點CXCR4制備了其嵌合抗原受體CXCL12，感染制備T淋巴細胞，通過體外殺傷實驗、荷瘤大鼠動物實驗后顯示了優越的抗腫瘤治療的療效且未發現明顯的不良反應。同時，這是一種廣譜的腫瘤細胞治療方法。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體涉及一種CAR-CXCL12 T淋巴細胞及其制備方法。

背景技術

嵌合抗原受體基因修飾T(chimeric antigen receptor gene-modified T，CART)細胞療法是當前腫瘤免疫細胞治療的研究熱點及重點。它將抗體對腫瘤抗原的高度親和性和T淋巴細胞的殺傷機制有機結合，使CAR-T能特異性地識別腫瘤細胞，還能不依賴MHC的限制性而直接殺傷腫瘤細胞。有研究表明，它在血液系統腫瘤治療已經取得重要進展，并且正在逐漸延伸到實體瘤的臨床治療中，有望攻克實體瘤治療的難關。嵌合型抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)是一種融合分子，由胞外抗原結合區，跨膜區及與T細胞受體(T cell receptor，TCR)的胞內信號區構成。其中胞外抗原結合區是賦予CAR-T細胞識別特定腫瘤抗原的關鍵部分，它源于抗體的抗原結合基序，具備連接VH和VL序列構建單鏈可變區(single chain fragment variable，ScFv)的作用。這決定了重組CARs與抗原的結合可以不依靠MHC的遞呈，這可以避免腫瘤細胞MHC表達下調這一免疫逃逸機制；跨膜區連接胞外抗原結合區和胞內信號區，一般由二聚體膜蛋白組成，主要包括CD3ζ、CD4、CD8、CD28等，能將CARs結構錨定于T細胞膜上。胞內信號區采用免疫受體酪氨酸活化基序(immune-receptor tyrosine-based activationmotifs，ITAM)，CARs接受腫瘤相關抗原(tumor-associated angtige，TAA)信息后，不直接傳遞信號，而是通過CD3或高親和性受體Fc RI的胞內區使T細胞活化，活化后的T細胞分泌孔蛋白、顆粒酶及細胞因子協同作用殺死腫瘤細胞，發揮效應功能。免疫細胞治療技術中的CAR-T療法近年來發展非常迅速，通過基因改造的技術給T細胞加入嵌合抗體后，其靶向性、殺傷活性和持久性均較常規應用的T細胞有所提高。CAR-T技術不僅可以克服腫瘤局部免疫抑制微環境和打破宿主免疫耐受狀態，還可以每次只靶向一種類型的腫瘤抗原，為腫瘤治療帶來了新的希望。

現有的嵌合抗原受體T淋巴細胞治療(CAR-T)只是針對血液系統腫瘤，在實體瘤中的應用未見突破。具體原因多為：1、缺少特異性靶點；2、CAR-T細胞不能進入實體瘤內。本發明是在和腫瘤放療聯合解決了腫瘤的特異性靶點問題及實體瘤的屏障問題，是一種廣譜的腫瘤細胞治療方法。

發明內容

本發明的目的在于提出一種CAR-CXCL12 T淋巴細胞及其制備方法，通過基因芯片篩選靶點CXCR4，針對靶點CXCR4制備了其嵌合抗原受體CXCL12，感染制備T淋巴細胞，通過體外殺傷實驗、荷瘤大鼠動物實驗后顯示了優越的抗腫瘤治療的療效且未發現明顯的不良反應。同時，這是一種廣譜的腫瘤細胞治療方法。

本發明的技術方案是這樣實現的：

本發明提供一種CAR-CXCL12修飾的T淋巴細胞，所述T細胞的表達靶向CXCR4的嵌合抗原受體為CAR-CXCL12，其基因序列見SEQ ID NO.1。

本發明進一步保護一種上述CAR-CXCL12修飾的淋巴T細胞的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(A)提供一待改造的T淋巴細胞；和

(B)對所述的免疫細胞進行改造，從而使得所述的免疫細胞表達靶向CXCR4的嵌合抗原受體CAR-CXCL12，從而獲得CAR-CXCL12修飾的T淋巴細胞。