[發明專利]一種用于香蕉枯萎病菌milRNA檢測的內參基因及其應用有效
| 申請號： | 202110632523.8 | 申請日： | 2021-06-07 |
| 公開（公告）號： | CN113234804B | 公開（公告）日： | 2022-11-29 |
| 發明（設計）人： | 李敏慧;畢蕓田;曾敬;鐘家祺;孔廣輝;李華平;姜子德 | 申請（專利權）人： | 華南農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/113;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245 | 代理人： | 蘇運貞 |
| 地址： | 510642 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 香蕉 枯萎 病菌 milrna 檢測 內參 基因 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.milR46作為內參基因在定量檢測香蕉枯萎病病菌侵染的各階段中milRNA基因表達水平中的應用，其特征在于：
所述的香蕉枯萎病病菌為尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種；
所述的milR46的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：
所述的milR46的前體的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：
特異性擴增所述的milR46的引物中的正向引物的序列如SEQ ID NO.10所示。
4.一種香蕉枯萎病病菌侵染的各階段中milRNA基因表達水平的檢測方法，其特征在于：
包括如下步驟：
S1、milRNA的反轉錄
提取待檢測香蕉枯萎病病菌的總RNA，首先在Poly A聚合酶的作用下，對milRNAs的3’末端加多聚A尾，然后在逆轉錄酶的作用下生成milRNAs對應的第一鏈cDNA；所述的香蕉枯萎病病菌為尖孢鐮刀菌古巴專化型4號生理小種；
S2、milRNA的表達量檢測
以步驟S1中反轉錄得到的cDNA為模板，根據目標milRNAs的序列設計的特異性引物和PCR試劑進行定量PCR，以權利要求1中所述的milR46作為定量PCR的內參，進行表達量分析。
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