[發明專利]一種O-乙酰-L-高絲氨酸生產菌、構建方法及應用有效

申請號：	202110627491.2	申請日：	2021-06-04
公開（公告）號：	CN113388564B	公開（公告）日：	2022-03-01
發明（設計）人：	柳志強;李波;張博;鄭裕國	申請（專利權）人：	浙江工業大學
主分類號：	C12N1/21	分類號：	C12N1/21;C12N15/31;C12N15/54;C12N15/70;C12P13/06;C12R1/19
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種乙酰絲氨酸生產構建方法應用
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【權利要求書】：

1.一種O-乙酰-L-高絲氨酸生產菌，由如下方法構建獲得：

（1）以E. coli W3110為底盤菌，將其基因組中的metA、metB、thrB和metJ基因敲除，得到重組菌株W3110 △metA△metB△thrB△metJ，記為OAHL4；

（2）將源自Bacillus cereus的基因metA整合入質粒pACYCDuet-1中，得到質粒pACYCDuet-metA；將質粒pACYCDuet-metA導入步驟（1）所述重組菌OAHL4中，得到所述O-乙酰-L-高絲氨酸生產菌。

2.如權利要求1所述的O-乙酰-L-高絲氨酸生產菌，其特征在于所述源自Bacillus cereus的基因metA核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.構建權利要求1所述的O-乙酰-L-高絲氨酸生產菌的方法，其特征在于所述方法如下：

（1）運用CRISPR-Cas9基因編輯技術，將底盤菌E. coli W3110基因組中的metA、metB、thrB和metJ基因敲除，得到重組菌株W3110 △metA△metB△thrB△metJ，記為OAHL4；

（2）將核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的外源基因metA整合入質粒pACYCDuet-1中，得到質粒pACYCDuet-metA；將質粒pACYCDuet-metA導入步驟（1）所述重組菌OAHL4中，得到所述O-乙酰-L-高絲氨酸生產菌。

4.權利要求1所述O-乙酰-L-高絲氨酸生產菌在微生物發酵制備O-乙酰-L-高絲氨酸中的應用。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于所述應用為：將所述O-乙酰-L-高絲氨酸生產菌接種至發酵培養基中，于28~32 ℃、100~500 rpm條件下進行發酵培養36~48h，發酵結束后取發酵液上清分離純化得到O-乙酰-L-高絲氨酸；所述發酵培養基組成如下：葡萄糖10~30g/L、硫酸銨10~20g/L、酵母浸粉1~5g/L、KH₂PO₄ 1~5g/L、MgSO₄ 0.1~2.0g/L、CaCO₃ 10~20g/L、微量金屬鹽溶液0.5~5mL/L，pH 6.5~7.0，溶劑為去離子水；微量金屬鹽溶液組成為：10 g/L CuCl₂、10 g/L FeSO₄·7H₂O、1 g/L ZnSO₄·7H₂O、0.20 g/L CuSO₄、0.02 g/LNiCl₂·7H₂O，溶劑為去離子水。