[發(fā)明專利]一種禽流感病毒H9型的AlphaLISA檢測試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110625853.4
• 申請日: 2021-06-04
• 公開（公告）號: CN113341141A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳勝昔;曾政;梁望旺;羅彬彬;侯力嘉;駱璐;曹蕓;陳忠瓊;劉姿怡;黃蕾;陳婷婷;楊溪
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶理工大學(xué);重慶市動物疫病預(yù)防控制中心
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76
• 代理公司: 重慶博凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50212
• 代理人: 李媛

1.一種禽流感病毒H9型的AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括如下單獨包裝的A1)-A3)所述的物質(zhì)：A1)生物素標(biāo)記的禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體；A2)偶聯(lián)有抗禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體的受體微球；A3)鏈霉親和素偶聯(lián)供體微球；編碼所述禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述禽流感病毒H9型的AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于，所述偶聯(lián)有抗禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體的受體微球的濃度為10~100μg/mL；所述生物素標(biāo)記的禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體的濃度為0.2~2μg/mL；所述鏈霉親和素偶聯(lián)供體微球的濃度為10~100μg/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述禽流感病毒H9型的AlphaLISA檢測試劑盒，其特征在于，所述偶聯(lián)有抗禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體的受體微球的濃度為50μg/mL；所述生物素標(biāo)記的禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體的濃度為0.5μg/mL；所述鏈霉親和素偶聯(lián)供體微球的濃度為50μg/mL。

4.權(quán)利要求1~3任一所述的試劑盒在檢測禽流感病毒H9型中的應(yīng)用；或，權(quán)利要求1~3任一所述的試劑盒在制備檢測禽流感病毒H9型的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

5.一種應(yīng)用權(quán)利要求1~3任一所述試劑盒的檢測方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

1）將所述偶聯(lián)有抗禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體的受體微球和所述生物素標(biāo)記的禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體加入反應(yīng)板的各檢測孔中，然后向所述檢測孔中加入待測樣品，混勻后置于培養(yǎng)箱孵育；

2)向步驟1)得到的檢測孔中加入鏈霉親和素標(biāo)記的供體微球，混勻后置于培養(yǎng)箱孵育；

3)將步驟2）反應(yīng)后的反應(yīng)板置于AlphaScreen／Lisa檢測儀上檢測信號值，根據(jù)所述檢測信號值判斷待測樣品中是否含有禽流感病毒H9型。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述孵育溫度為37℃，所述孵育時間為15~30min。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述待檢測樣品的檢測信號值大于本底值的2倍時，即待檢測樣品中含有禽流感病毒H9型。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述偶聯(lián)有抗禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體的受體微球與1xAphaLISA緩沖液按1:50~1:100體積比稀釋；所述生物素標(biāo)記的禽流感病毒H9型囊膜蛋白血凝素單克隆抗體與1xAphaLISA緩沖液按1:100~1:200體積比稀釋。

9.根據(jù)權(quán)利要求5所述檢測方法，其特征在于，所述AlphaScreen／Lisa檢測儀檢測時激發(fā)光波長為680nm，發(fā)射光檢測波長為520~620nm。