[發(fā)明專利]一種瀉白散基準(zhǔn)樣品指紋圖譜的檢測及控制方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110620850.1
• 申請日: 2021-06-03
• 公開（公告）號: CN113376274B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張彤;高崎;李婷;王丹丹;丁越;朱國琴;劉云;江美芳
• 申請（專利權(quán)）人: 上海上藥杏靈科技藥業(yè)股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/86
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種瀉白散基準(zhǔn)樣品的指紋圖譜的檢測方法，包括以下步驟：

1）供試品溶液的制備：將瀉白散樣品加水溶解，獲得的溶解液加有機(jī)溶劑定容，離心、過濾，獲得供試品溶液；

2）對照品溶液的制備：提供對照品溶液，所述對照品溶液包括桑皮苷A、綠原酸、地骨皮乙素、地骨皮甲素、甘草苷、甘草素、甘草酸銨對照品和有機(jī)溶劑；

3）測定：采用相同色譜條件的高效液相色譜法分別測定供試品溶液和對照品溶液，獲得供試品溶液的指紋圖譜和對照品溶液的指紋圖譜，將供試品溶液的指紋圖譜與對照品溶液的指紋圖譜進(jìn)行比較，對供試品溶液指紋圖譜中的指標(biāo)成分進(jìn)行歸屬定位，從而獲得瀉白散基準(zhǔn)樣品的指紋圖譜；

步驟3）中，所述高效液相色譜法中的色譜柱為Agilent Zorbax SB-Aq C₁₈毛細(xì)管色譜色譜柱，250 mm×4.6 mm，5μm；檢測器為光電二極管陣列檢測器DAD；柱溫為25℃；進(jìn)樣量為20μL；流速為1.0mL/min；檢測波長為273nm；流動(dòng)相為0.1%三氟乙酸水溶液-乙腈，其中，A相為0.1%三氟乙酸水溶液，B相為乙腈；分析時(shí)間為75min；梯度洗脫；

所述梯度洗脫的具體程序?yàn)椋?/p>

0-40min，A相：B相體積比為95：5-80：20；

40-60min，A相：B相體積比為80：20-60：40；

60-70min，A相：B相體積比為60：40-2：98。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種瀉白散基準(zhǔn)樣品的指紋圖譜的檢測方法，其特征在于，步驟1）或2）中，包括以下條件中任一項(xiàng)或多項(xiàng)：

A1）步驟1）中，所述瀉白散樣品為冷凍干燥后的瀉白散水提液，所述瀉白散水提液與水加入的體積之比為1:1-2；

A2）步驟1）或2）中，所述有機(jī)溶劑為甲醇；

A3）所述溶解液的取液量與有機(jī)溶劑的加入的體積之比為1:1-2；

A4）所述離心條件為：離心時(shí)間為5-10min，離心速率為5000-10000rpm。

3.一種瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法，包括：通過采用權(quán)利要求1-2任一所述的瀉白散基準(zhǔn)樣品的指紋圖譜的檢測方法分別對多批瀉白散樣品進(jìn)行檢測，獲得多批瀉白散樣品的指紋圖譜生成共有模式對照圖譜，以圖譜中均存在的色譜峰作為共有特征峰，確定共有特征峰的相對保留時(shí)間、各共有特征峰面積與總峰面積的比值，并根據(jù)相對保留時(shí)間對瀉白散樣品的指紋圖譜中指標(biāo)成分進(jìn)行歸屬定位，建立瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，以各共有峰的保留時(shí)間與參照峰的保留時(shí)間比值作為相對保留時(shí)間，包括19個(gè)共有指紋峰，以6號峰為參照峰S峰，保留時(shí)間為1.0000，其他18個(gè)共有指紋峰的相對保留時(shí)間依次為1號峰0.3912、2號峰0.4301、3號峰0.6258、4號峰0.7265、5號峰0.8065、7號峰1.0437、8號峰1.1725、9號峰1.2216、10號峰1.2768、11號峰1.3476、12號峰1.3871、13號峰1.4666、14號峰1.5049、15號峰1.8411、16號峰1.8958、17號峰2.3548、18號峰2.4704、19號峰2.7589；上述除6號峰外18個(gè)共有特征峰的相對保留時(shí)間的相對偏差均≤±10%；所述瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中共有特征峰面積占總色譜峰面積的百分比≥65%。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，所述瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜中，定位確定7個(gè)指紋峰：6號峰為桑皮苷A、7號峰為綠原酸、9號峰為地骨皮乙素、10號峰為地骨皮甲素、16號峰為甘草苷、18號峰為甘草素、19號峰為甘草酸銨。

6.一種瀉白散的指紋圖譜的質(zhì)量控制方法，包括：采用權(quán)利要求1-2任一所述的瀉白散基準(zhǔn)樣品的指紋圖譜的檢測方法獲得瀉白散基準(zhǔn)樣品的指紋圖譜，與采用權(quán)利要求3-5任一所述的瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的構(gòu)建方法獲得的瀉白散的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，進(jìn)行相似度比較。