[發明專利]一種基于數字PCR檢測血漿游離DNA甲基化的組合物及其應用

在審

• 申請號: 202110616122.3
• 申請日: 2021-06-02
• 公開（公告）號: CN113278699A
• 公開（公告）日: 2021-08-20
• 發明（設計）人: 田亞平;張朋軍;隋亞鑫
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 鎮江至睿專利代理事務所(普通合伙) 32529
• 代理人: 劉靜

1.一種基于數字PCR檢測血漿游離DNA甲基化的組合物，其特征在于，所述血漿游離DNA甲基化的標志物為基因Reprimo和/或基因RNF180，所述組合物包括上游引物、下游引物、甲基化探針M-Probe、非甲基化探針U-Probe。

2.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述Reprimo基因的上游引物F的序列如SE ID NO.1所示、下游引物R的序列如SE ID NO.2所示、甲基化探針M-Probe的序列如SE IDNO.3所示、非甲基化探針U-Probe的序列如SE ID NO.4所示。

3.根據權利要求1所述的組合物，其特征在于，所述RNF180基因的上游引物FP的序列如SE ID NO.5所示、甲基化下游引物RP-M的序列如SE ID NO.6所示、非甲基化下游引物RP-UM的序列如SE ID NO.7所示、甲基化探針M-Probe的序列如SE ID NO.8所示、非甲基化探針U-Probe的序列如SE ID NO.9所示。

4.根據權利要求2或3所述的組合物，其特征在于，所述甲基化探針M-Probe、非甲基化探針U-Probe的5’端連接有熒光基團，3’端連接有猝滅基團。

5.一種基于數字PCR檢測基因甲基化的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1-4任一所述的組合物。

6.一種基于數字PCR檢測基因甲基化的方法，其特征在于，所述方法用于疾病非診斷和治療目的，所述方法包括以下步驟，

(1)提取待測樣品中的cfDNA；

(2)亞硫酸氫鹽轉化；

(3)采用權利要求1-4任一所述的組合物或權利要求5所述的試劑盒通過數字PCR檢測所述基因的甲基化，所述基因為基因Reprimo和/或基因RNF180。

7.據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述樣品為血漿、血清、淋巴、尿或組織活檢，優選血漿。

8.權利要求1-4任一所述的組合物或權利要求5所述的試劑盒在制備檢測胃癌的產品中應用。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述胃癌包括惡性腫瘤導致的胃癌或良性腫瘤導致的胃癌。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述良性腫瘤為胃多發息肉、胃平滑肌瘤、胃腸道間質瘤以及胃梭形細胞腫瘤。