[發(fā)明專利]編碼可溶性HPV23 L1蛋白的基因及其重組質粒的構建與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110615459.2
• 申請日: 2021-06-02
• 公開（公告）號: CN113528544B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發(fā)明（設計）人: 王愛萍;陳玉梅;周景明;劉紅亮;劉燕凱;梁超;丁培陽;朱習芳
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N15/37
• 分類號: C12N15/37;C07K14/025;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 鄭州盈派知識產權代理事務所(普通合伙) 41196
• 代理人: 張曉輝;樊羿

本發(fā)明公開了一種編碼可溶性HPV23 L1蛋白的基因及其重組質粒的構建與應用。本發(fā)明在綜合多重復雜因素的基礎上，對HPV23L1基因進行優(yōu)化，并構建了重組質粒pUC?23L1、pET32a?23L1和pESUMO?23L。本發(fā)明HPV23L1基因能顯著提高目的蛋白可溶性表達的效率，且產品性質均一、穩(wěn)定，發(fā)酵破菌液上清中的目的蛋白表達量可達到100μg/ml，從而滿足工業(yè)化生產的要求；本發(fā)明提供了一種原核表達可溶性人乳頭瘤病毒23亞型L1蛋白的方法，該方法將HPV23L1蛋白與SUMO蛋白融合表達，可以獲得可溶性好、具有明顯血凝活性的重組表達蛋白。

技術領域

本發(fā)明涉及基因工程技術領域，具體涉一種編碼可溶性HPV23 L1蛋白的基因及其重組質粒的構建與應用。

背景技術

人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）是一類雙鏈小分子DNA病毒，具有嚴格的種屬特異性，主要感染人的皮膚和粘膜組織，引起相應部位上皮組織的增生性病變。1977年Laverty（Laverty,C.R.,Russell,P.et al.1977）在電鏡中觀察到宮頸癌組織中存在HPV顆粒

根據核酸序列同源性，目前發(fā)現(xiàn)的HPV約有200多種基因型 (Chen, Casini etal. 2001)。根據“屬”的分類水平，HPV可分為α屬、β屬等(Dawes 2005)。α屬，也被稱為粘膜HPV，主要感染生殖器和粘膜，導致良性皮膚疣和其他疾病；β屬HPV主要侵染部位是皮膚(deKoning, Struijk et al. 2007)。HPV23屬于乳頭瘤病毒科（Papillomaviridae）β-乳頭瘤病毒屬（Betapapillomavirus）的β-乳頭瘤病毒2型（Betapapillomavirus2），是最常見的β屬PV型(de Koning, Struijk et al. 2007)；其基因組由7.3kb的環(huán)狀雙鏈DNA以及兩個較短片段組成(Atkinson, Bishop et al. 2017)。HPV為二十面體、立體對稱的結構、不具有包膜，主要衣殼蛋白L1和次要衣殼蛋白L2構成了HPV的衣殼結構；HPV主要衣殼蛋白L1可自組裝的病毒樣顆粒（VLPs）(Huber, Wang et al. 2021)，它們是非常有效的預防性免疫原，具有類似HPV天然病毒的血凝活性(Chen, Liu et al. 2016)。

HPV基因組長約8kb，分子量約為5×10⁶道爾頓，直徑為50～60nm，正二十面體結構。核心為單拷貝的基因組DNA，病毒衣殼由主要衣殼蛋白（L1）和次要衣殼蛋白（L2）組成；其中L1蛋白是較大的衣殼蛋白，分子量為55～60kDa，為主要衣殼蛋白，是高度保守的糖蛋白，具有高度的免疫原性，也是HPV分型的依據，同時體外表達的HPV L1蛋白可自組裝成病毒樣顆粒（virus-like particle，VLP）（Kirnbauer,R. et al.,1992）；L2蛋白為次要衣殼蛋白是高度可變核蛋白，反映HPV抗原的多態(tài)性（Wang, J.W., Roden, R.B., 2013）。而且在病毒殼粒中大多數L2蛋白在L1蛋白內部；因此，在開發(fā)宮頸癌疫苗時，針對衣殼蛋白L1開發(fā)具有更好的針對性。