[發明專利]編碼可溶性HPV23 L1蛋白的基因及其重組質粒的構建與應用

有效

• 申請號: 202110615459.2
• 申請日: 2021-06-02
• 公開（公告）號: CN113528544B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 王愛萍;陳玉梅;周景明;劉紅亮;劉燕凱;梁超;丁培陽;朱習芳
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: C12N15/37
• 分類號: C12N15/37;C07K14/025;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 鄭州盈派知識產權代理事務所(普通合伙) 41196
• 代理人: 張曉輝;樊羿

1.一種編碼可溶性人乳頭瘤病毒23亞型L1蛋白的基因HPV23L1，其DNA序列如SEQ IDNO.1所示。

2.一種載體質粒pUC-23L1，包括載體質粒pUC57及裝載其中的權利要求1所述基因HPV23L1。

3.一種重組質粒pESUMO-23L1，包括載體質粒pE-SUMO及裝載其中的權利要求1所述基因HPV23L1。

4.一種重組質粒pET32a-23L1，包括載體質粒pET32及裝載其中的權利要求1所述基因HPV23L1。

5.一種表達可溶性HPV23 L1蛋白的重組質粒，含有權利要求1所述基因HPV23L1。

6.權利要求5所述表達可溶性HPV23 L1蛋白的重組質粒的構建方法，包括如下步驟：

（1）設計權利要求1所述基因HPV23L1的擴增引物，且其正向引物包含EcoR I 或Bsa I限制性內切酶位點、反向引物包括位于終止密碼子側翼的Xho I限制性內切酶位點；

（2）以所述擴增引物PCR擴增基因HPV23L1；

（3）取pET32或pESUMO質粒與所得PCR擴增產物分別進行限制性內切核酸酶EcoR I 或Bsa I與Xho I雙酶切消化，回收空載體質粒pET32或pE-SUMO和HPV23 L1基因的雙酶切產物，用T4 DNA連接酶16℃連接過夜，得到重組質粒；

（4）將上步所得重組質粒pET32a-23L1或pESUMO-23L1轉化大腸桿菌感受態細胞BL21，涂布在Amp⁺/LB固體培養基上培養，挑取單菌落進行菌液PCR鑒定，篩選陽性菌落，提取陽性菌落質粒，測序結果正確的即為表達可溶性HPV23 L1蛋白的重組質粒。

7.根據權利要求6所述重組質粒的構建方法，其特征在于，所述擴增引物的序列如下：

F-23-A 5’-CGCGAATTCATGACCCTGTGGCTGC-3’， 酶切位點EcoR I

F-23-B 5’-TTGGTCTCTAGGTATGACCCTGTGGCTGC-3’，酶切位點Bas I

R-23 5’-CCGCTCGAGTTACAGCTGCACTTTTTTACGTT-3’，酶切位點Xho I。

8.一種可溶性人乳頭瘤病毒23亞型L1蛋白的制備方法，包括如下步驟：

（1）取權利要求3所述重組質粒pESUMO-23L1或權利要求4所述重組質粒pET32a-23L1接種于Amp⁺/LB液體培養基中培養至OD₄₅₀值至0.75～0.85時，在誘導劑IPTG濃度為0.3 mmol/L、18℃條件下誘導表達；

（2）誘導表達結束后，離心收集菌體，清洗后破碎，并離心分離，收集上清液；

（3）將所述上清液通過Ni親和層析柱進行洗脫純化得SUMO-23 L1蛋白。