[發明專利]一種檢測恩諾沙星和金剛烷胺的兩用試紙條及其制備方法和檢測方法

在審

• 申請號: 202110611352.0
• 申請日: 2021-06-01
• 公開（公告）號: CN113552360A
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 邱靜;寧香雪;賈琪;錢永忠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院農業質量標準與檢測技術研究所
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/558
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 黃燕

1.一種檢測恩諾沙星和金剛烷胺的兩用試紙條，其特征在于，所述試紙條包括底板，在所述底板的表面沿層析方向依次鋪設有樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，且所述樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊依次固定連接，所述硝酸纖維素膜上包被有兩條檢測線和質控線，兩條所述檢測線是指包被有金剛烷胺抗原的檢測線和包被有恩諾沙星抗原的檢測線，所述質控線是指包被有X抗鼠IgG的質控線；所述膠體金結合墊上設有金剛烷胺抗體、恩諾沙星抗體和膠體金的偶聯物；所述X為羊或兔。

2.一種如權利要求1所述的檢測恩諾沙星和金剛烷胺的兩用試紙條的制備方法，其特征在于，其包括如下步驟：

在所述底板上，將所述樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊拼接為試紙條；

所述硝酸纖維素膜上包被有兩條檢測線和質控線。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括在所述硝酸纖維素膜上間隔包被濃度為0.3-0.8mg/mL的金剛烷胺抗原和濃度為0.3-0.8mg/mL的恩諾沙星抗原作為檢測線，并在所述硝酸纖維素膜上包被0.3-0.8mg/mL的X抗鼠IgG作為質控線，且所述質控線與所述檢測線間隔設置。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，在所述硝酸纖維膜上，每0.3-2cm長度上噴1-6μL的金剛烷胺抗原或恩諾沙星抗原作為兩條檢測線，每0.3-2cm長度上噴1-6μL的X抗鼠IgG作為質控線，相鄰兩條線之間的間距為0.2-0.5cm；

所述制備方法還包括在所述硝酸纖維膜上噴設兩條檢測線和質控線后進行干燥。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，在將所述樣品墊、膠體金結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊進行拼接之前還包括制備金剛烷胺抗體、恩諾沙星抗體和膠體金的偶聯物，并將所述金剛烷胺抗體、恩諾沙星抗體和膠體金的偶聯物噴于結合墊上制得所述膠體金結合墊，所述膠體金結合墊包括膠體金－金剛烷結合墊和膠體金－恩諾沙星結合墊；

所述金剛烷胺抗體、恩諾沙星抗體和膠體金的偶聯物的制備包括：分別制備金剛烷胺抗體與膠體金的偶聯物和恩諾沙星與膠體金的偶聯物，將所述金剛烷胺抗體與膠體金的偶聯物噴于結合墊上制得膠體金－金剛烷結合墊，將所述恩諾沙星與膠體金的偶聯物噴于結合墊上制得膠體金－恩諾沙星結合墊；

所述金剛烷胺抗體與膠體金的偶聯物的制備包括：將膠體金溶液、硼酸鉀溶液、金剛烷胺抗體溶液和牛血清白蛋白溶液混合制得混合液，離心后的沉淀用磷酸緩沖液PB復溶制得金剛烷胺抗體和膠體金的偶聯物；

所述恩諾沙星抗體和膠體金的偶聯物的制備包括：將膠體金溶液、硼酸鉀溶液、恩諾沙星抗體溶液和牛血清白蛋白溶液混合制得混合液，離心后的沉淀用磷酸緩沖液PB復溶制得金剛烷胺抗體和膠體金的偶聯物；

每1mL膠體金溶液中添加2.5－3.5μL濃度為2mg/mL的金剛烷胺抗體溶液或1.5－2.5μL濃度為2mg/mL的恩諾沙星抗體溶液，添加0.1M的硼酸鉀溶液30－50μL，添加25－45μL的0.5－1.5wt％BSA溶液；

優選地，在將所述金剛烷胺抗體溶液或所述恩諾沙星抗體溶液加入混合前還包括對金剛烷胺抗體或所述恩諾沙星抗體進行透析和復溶處理；所述透析是依次使用磷酸緩沖液PB以及蒸餾水進行透析，并用超純水進行復溶；

優選地，在將所述結合墊上噴金前還包括對結合墊進行預處理，所述預處理是將含0.5－1.5wt％牛血清白蛋白和0.5－1.5％吐溫－20溶液的0.005－0.015M PBS溶液均布在所述結合墊上，并干燥。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，離心后的沉淀用磷酸緩沖液PB和5－10wt％的蔗糖復溶；

優選地，每1－2cm的結合墊上噴2－5μL的所述金剛烷胺抗體和膠體金的偶聯物；每1－2cm的結合墊上噴2－5μL的所述恩諾沙星抗體和膠體金的偶聯物。

7.一種同時檢測恩諾沙星和金剛烷胺的試劑盒，其特征在于，其包括權利要求1所述的檢測恩諾沙星和金剛烷胺的兩用試紙條以及殼體。