[發(fā)明專利]一種玉米多堆柄銹菌致病型鑒別寄主體系構(gòu)建和鑒定方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110610493.0
• 申請日: 2021-06-01
• 公開（公告）號: CN114032279A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬占鴻;黃莉群;孫秋玉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京安博達知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11271
• 代理人: 徐國文

1.一種玉米多堆柄銹菌致病型鑒別寄主體系構(gòu)建和鑒定方法，其特征在于，將玉米多堆柄銹菌的單孢子堆接種到健康玉米苗上，發(fā)病后再次將已發(fā)病的玉米多堆柄銹菌的單孢子堆接種到健康玉米苗上經(jīng)轉(zhuǎn)接二次純化，獲得足量單孢系；

從28個玉米品種田間病情指數(shù)中挑出抗病品種，抗病品種接種多個二次純化的單孢系，篩選同時表現(xiàn)抗病和感病的玉米品種；

采用全國182個單孢系進行鑒定并找出頻率高的致病型；所述方法包括如下步驟：

(一)收集種子并種苗；

(二)菌種收集：供試玉米南方銹菌菌種采自海南三亞、廣東河源、廣西桂林、廣西河池、云南玉溪和湖南邵陽的玉米南方銹病樣品，其中，除海南菌株經(jīng)溫室人工擴繁并收集夏孢子備用外其他地區(qū)菌株均為直接從田間病株樣品上刮取夏孢子備用；

(三)田間接菌：在玉米大喇叭口期將步驟(二)所收集的菌種進行田間接菌；

(四)抗病品種篩選：根據(jù)田間發(fā)病后的病情指數(shù)挑選的接種不同地區(qū)菌株后，同時出現(xiàn)感病和抗病的并綜合多地區(qū)菌源呈現(xiàn)抗病的玉米品種；

(五)單孢系擴繁：經(jīng)過二次純化，培養(yǎng)全國各地多個單孢系；

(六)抗病品種復(fù)篩選：將步驟(三)篩選出的抗病品種接種多個二次純化后的單孢系，選出同時可以抗病和感病的玉米品種；

(七)致病型劃分：采用二進制方法累加法對致病型分類；

(八)致病型鑒定：使用2020年的182個單孢系鑒定，找出我國頻率最高的玉米多堆柄銹菌致病型。

2.如權(quán)利要求1的玉米多堆柄銹菌致病型鑒別寄主體系構(gòu)建和鑒定方法，其特征在于，其中：

步驟(二)供試多堆柄銹菌采自海南三亞、廣東河源、廣西桂林、廣西河池、云南玉溪和湖南邵陽六個地區(qū)；

步驟(三)，用海綿摩擦待接菌的玉米葉片，去除蠟質(zhì)層后，分別將所述6個地區(qū)各收集的2mg夏孢子，用5‰濃度的Tween-20水溶液配制成1L孢子懸浮液，于傍晚噴霧接種于小區(qū)接種中心的天貴糯937葉片；用保鮮膜覆蓋接種后的葉片保濕12h后去掉保鮮膜，并于第二天晨間全田噴灌，提高田間濕度；發(fā)病后各接種區(qū)在每個玉米品種上的病情指數(shù)按下式計算：

病情指數(shù)(DI)＝100×∑(各級病葉數(shù)×各級代表值)/(調(diào)查總?cè)~數(shù)×最高級代表值)；

步驟(五)，將玉米多堆柄銹菌的單孢子堆接種到健康玉米苗上，將已發(fā)病的玉米多堆柄銹菌的單孢子堆再次接種到健康玉米苗上，獲得足量二次純化單孢系；

步驟(六)從最抗病的十個玉米品種中篩選出下述四個品種作為鑒別寄主：裕豐303、登海605、登海685和美玉11號；

步驟(七)所述選出的玉米品種按順序排列，感抗反應(yīng)用式二進制方法表示；

如品種1上的感病、品種2上的感病、品種3上的感病和品種四上的抗病，則根據(jù)1(S)×2³+1(S)×2²+1(S)×2¹+0(R)×2⁰＝14，將毒力模式定為SSSR-14；

步驟(八)利用挑選出來的所述四個品種對我國182個二次純化的多堆柄銹菌單孢系進行鑒定分析。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玉米多堆柄銹菌致病型鑒別寄主體系構(gòu)建和鑒定方法，其特征在于，所述步驟(二)或步驟(三)菌源來自不同地區(qū)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的玉米多堆柄銹菌致病型鑒別寄主體系構(gòu)建和鑒定方法，其特征在于，所述步驟(四)的抗病玉米品種是綜合多地區(qū)菌源呈現(xiàn)抗病的玉米品種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的玉米多堆柄銹菌致病型鑒別寄主體系構(gòu)建和鑒定方法，其特征在于，所述步驟(四)的品種篩選包括，在相同條件下，針對不同地區(qū)同時抗病和感病的玉米品種。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的玉米多堆柄銹菌致病型鑒別寄主體系構(gòu)建和鑒定方法，其特征在于，所述步驟(八)和步驟(五)中，玉米多堆柄銹菌來自大范圍取樣，且均經(jīng)二次純化擴繁。